田萍萍，崔翠菊，刘延岭，李晓捷，梁广津，彭捷，李言，王利芹（山东东方海洋科技股份有限公司，国家海藻与海参工程技术研究中心，山东省海藻遗传育种与栽培技术重点实验室，山东　烟台　264003）

褐藻酸酶的制备及对海带细胞解离的应用研究

田萍萍，崔翠菊，刘延岭，李晓捷，梁广津，彭捷，李言，王利芹
（山东东方海洋科技股份有限公司，国家海藻与海参工程技术研究中心，山东省海藻遗传育种与栽培技术重点实验室，山东烟台264003）

摘要：褐藻中富含褐藻酸，应用酶解法制备褐藻单细胞和原生质体时，高活性的褐藻酸酶是所用工具酶中的主要组分。文中介绍了用硫酸铵二级盐析和透析袋脱盐从鲍鱼的消化腺中提取褐藻酸酶的方法，测定酶活力及蛋白含量，检测该褐藻酸酶对海带细胞的解离效果。结果显示，该褐藻酸酶比活力为12 U/mg，酶活力单位为34 U/mL，得率为1.4%。用含此褐藻酸酶的酶解液解离海带细胞，酶解3～6 h内可得到游离单细胞及原生质体的数量在3×105～6×105个/g。该褐藻酸酶解离海带细胞效果显著，且本方法简单、快捷且经济。

关键词：褐藻酸酶；硫酸铵二级盐析；酶活力；海带；原生质体

近几年来，褐藻单细胞和原生质体培养成为褐藻生物技术的新型研究领域，同时也为褐藻育种技术提供了新的途径。游离的单细胞和原生质体通常可以采取机械磨法、愈伤组织和酶解法自藻体获得，但机械法效率低下且细胞损伤大，愈伤组织的获得较难，而酶解法反应条件温和，能使体细胞受到的伤害降到最低程度，故而它是目前最有效的一种获得细胞和原生质体的方法。……