谢茂云，黄耀，彭家桃，王新根，余利娃

（广东医学院附属福田医院，广东 深圳 518033）



程序性细胞死亡因子4在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义*

谢茂云，黄耀，彭家桃，王新根，余利娃

（广东医学院附属福田医院，广东 深圳 518033）

目的研究程序性细胞死亡因子4（PDCD4）蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测PDCD4蛋白在62例甲状腺乳头状癌、20例癌旁正常组织及28例甲状腺良性肿瘤中的阳性表达，并结合临床资料进行统计学分析。结果甲状腺乳头状癌组织中PDCD4蛋白的阳性表达率明显低于癌旁正常组织及甲状腺良性肿瘤（P＜0.05）。随着PDCD4表达水平的降低，甲状腺乳头状癌恶性程度可能也随之增加（P＜0.05）。PDCD4蛋白表达与甲状腺乳头状癌淋巴结转移有统计学意义（P＜0.05）。 结论PDCD4蛋白在甲状腺乳头状癌中低表达，与甲状腺乳头状癌的发生发展有密切联系。

甲状腺乳头状癌；程序性细胞死亡因子4；免疫组织化学

程序性细胞死亡因子4（programmed cell death 4，PDCD4）是新近发现的与细胞凋亡相关的基因，已被证实为是一种肿瘤抑制基因。已有不少研究表明，PDCD4在肾癌、前列腺癌、肝细胞癌、胃癌、口腔唾液腺癌、卵巢癌等人类恶性肿瘤中表达低下或缺失［1-5］，但有关PDCD4在甲状腺癌组织中的表达研究在国内尚未见报道。甲状腺癌多起病隐匿，常以无痛性甲状腺结节为最初临床表现，具体机制不是十分明确，本研究利用免疫组织化学法，探讨PDCD4在甲状腺乳头状癌发生发展中的可能机制以及与肿瘤临床病理分期、淋巴结转移的关系，检测PDCD4在甲状腺乳头状癌的表达并探讨其临床意义。

1　资料与方法

1.1一般资料

选取2012年5月-2015年7月于广东医学院附属福田医院甲乳外科收治的住院患者。经病理诊断明确为甲状腺乳头状癌62例，作为甲状腺乳头状癌组（有淋巴结转移者21例，无淋巴结转移者41例），20例癌旁正常组织及28例甲状腺良性肿瘤作为对照组。所有患者术前都未作放疗、化疗及其他针对肿瘤的治疗。

1.2主要试剂及仪器

鼠抗人PDCD4抗体（美国Ray Biotech公司），SP免疫组织化学试剂盒及DAB显色试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司）。

1.3免疫组织化学法检测PDCD4的阳性表达

免疫组织化学主要步骤参照免疫组织化学SP检测试剂盒说明书进行操作，主要操作步骤为：标本用10%甲醛固定，脱水，石蜡包埋，5μm石蜡连续切片，切片厚度2μm，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，抗原修复，血清封闭，一抗稀释至1∶200，滴加一抗，体积分数1%过氧化氢H2O2封闭内源性过氧化物酶，滴加二抗及链霉亲和素-过氧化物酶复合物，DAB显色，苏木精复染。

1.4PDCD4阳性表达判定标准

PDCD4主要在核周、细胞浆阳性表达，以棕黄色或黄褐色颗粒为阳性细胞，在高倍视野下（×100），选取5个不重复阳性视野进行计数，根据染色强度和阳性细胞所占百分比进行评分判定。①按染色强弱：阴性为0分，染色弱但明显强于阴性对照者为1分，染色较强者为2分；染色强者为3分。②阳性细胞比例：阳性细胞比例≤10%为1分，11%～30%为2分，31%～60%为3分，＞60%为4分；上述两种分值相加≥3分为阳性。

1.5统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析，PDCD4各组间阳性表达率用χ2检验（必要时采用校正χ2检验或Fisher精确检验），P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1PDCD4蛋白在不同组织中的表达率

在癌旁正常组织及甲状腺良性肿瘤中PDCD4阳性颗粒以核周、细胞浆表达为主，呈棕黄色或黄褐色颗粒（见图1，A为癌旁正常组织，B为甲状腺腺瘤），在甲状腺乳头状癌组织中PDCD4阳性颗粒表达以细胞浆为主（见图2，A为PDCD4阳性表达，B为阴性表达）。PDCD4在甲状腺乳头状癌组织中的阳性表达率为27.4%（17/62），在癌旁正常组织及甲状腺良性肿瘤中的阳性表达率分别为 100.0%（20/20）、89.3%（25/28），组间比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

2.2PDCD4蛋白表达与甲状腺乳头状癌恶性程度及淋巴结转移的关系

PDCD4的阳性表达率随甲状腺乳头状癌临床病理分期的增高而降低，Ⅰ、Ⅱ期的癌组织PDCD4阳性表达率高于Ⅲ、Ⅳ期的癌组织，组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。淋巴结转移组的PDCD4阳性表达率低于无淋巴结转移组，组间比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

3组间比较差异有统计学意义，P＜0.05。其中甲状腺乳头状癌与癌旁正常组织比较，χ2=32.171，P= 0.000；甲状腺乳头状癌与甲状腺良性肿瘤相比较，χ2=29.663，P=0.000。

图1　癌旁正常组织及甲状腺良性肿瘤中PDCD4蛋白表达（SP×100）

图2　甲状腺乳头状癌组织中PDCD4蛋白表达（SP×100）

表1　PDCD4蛋白在不同组织中的表达率

表2　PDCD4蛋白表达与甲状腺乳头状癌恶性程度及淋巴结转移的关系

3　讨论

甲状腺癌是最常见的内分泌肿瘤，近年来发病率呈逐年上升的趋势，而甲状腺癌中以甲状腺乳头状癌为最多见。早期容易出现区域淋巴结转移，晚期可发生远处转移，其分化程度越差，恶性程度越高。虽然甲状腺癌的治疗取得了长足的进展，尤其是在外科治疗方面的发展取得较好的效果。但仍有少部分患者出现术后癌灶复发和转移情况，临床上对甲状腺癌的发病机制尚不十分明确，关于甲状腺癌的发病原因至今仍未完全探明，目前认为其为环境因素和个体遗传因素共同作用的结果。

PDCD4是一种新的肿瘤抑制因子，PDCD4的蛋白序列编码469个氨基酸，在蛋白序列的164-275区和329-440区两个区域各含有一个保守的a螺旋结构区-MA3。MA3同样也存在于真核翻译起始因子eIF4GⅠ和eIF4GⅡ中，因此PDCD4可以通过MA3的结构域竞争性的结合到eIF4A上。eIF4A是一种依赖ATP的RNA解旋酶，其能够展开mRNA，使核糖体移行到3’位，定位到起动密码子AUG上，从而启动基因的翻译。PDCD4通过阻止eIF4A和eIF4G的结合来抑制解螺旋酶活性，从而抑制翻译的进行［6-7］。也有研究发现PDCD4本身可以抑制自噬的发生，通过对LPS诱导自噬的几个通路进行分析，进一步探索发现LPS可以诱导磷酸化P38 MAPK的表达，并且在PDCD4-/-小鼠的巨噬细胞中，这种诱导作用更加明显，磷酸化P38 MAPK的表达明显高于c57小鼠，因此P38 MAPK通路可能是PDCD4调控自噬发生的主要通路。

本研究结果表明，PDCD4蛋白在癌旁正常组织全部阳性表达，在甲状腺良性肿瘤绝大多数呈阳性表达，而在甲状腺乳头状癌中的表达明显降低甚至缺失，并随着癌组织临床病理分期越差，PDCD4表达程度越低。这提示PDCD4可能与甲状腺乳头状癌的发生、发展与恶性程度密切相关。可能是因为PDCD4的表达下调，失去对真核翻译起始因子的抑制从而发挥类似癌基因的作用，同时低表达的PDCD4丧失其抑制癌细胞生长及抑制自噬发生的作用。有研究表明PDCD4可以作为结直肠癌新辅助化疗疗效及判断预后的客观指标［8］。对于肾癌、卵巢癌、乳腺癌患者，PDCD4缺失提示组织学分级较低，并且容易发生远处和淋巴结转移，可作为评估预后的一个指标［1，4，9］。结合本研究结果，PDCD4也可能成为甲状腺乳头状癌恶性程度、淋巴结转移及预后判断的一个因子。随着研究不断深入，PDCD4靶基因治疗或许也会成为甲状腺乳头状癌患者一个新的治疗途径。

［1］LI X，XIN S，YANG D，et al.Down regulation of PDCD4 expression is an independent predictor of poor prognosis in human renal cell carcinoma patients［J］.J Cancer Res Clin Oncol，2012，138（3）:529.

［2］CAO Z，YOON J H，NAM S W，et al.PDCD4 expression inversely correlated with miR-21 levels in gastric cancers［J］.J Cancer Res Clin Oncol，2012，138（4）:611.

［3］JIANG L H，GE M H，HOU X X，et al.miR-21 regulates tumor progression through the miR-21-PDCD4-Stat3 pathway in human salivary adenoid cystic carcinoma［J］.Lab Invest，2015，95（12）:1398-1408.

［4］WANG Y Q，GUO R D，GUO R M，et al.MicroRNA-182 promotes cell growth，invasion，and chemoresistance by targeting programmed cell death4（PDCD4）in human ovarian carcinomas［J］.J Cell Biochem，2013，114（7）:1464-1473.

［5］QIU X，DONG S，QIAO F，et al.HBx-mediated miR-21 upregulation represses tumor-suppressor function of PDCD4 in hepatocellular carcinoma［J］.Oncogene，2013，32:3296-3305.

［6］DENNIS M D，JEFFERSON L S，KIMBALL S R，et al.Role of p70S6K1-mediated phosphorylation of eIF4B and PDCD4 proteins in the regulation of protein synthesis［J］.J Biol Chem，2012，287（51）: 890-899.

［7］WATERS L C，STRONG S L，FERLEMANN E，et al.Structure of the tandem MA-3 region of Pdcd4 protein and characterization of its interactions with eIF4A and eIF4G:molecular mechanisms of a tumor suppressor［J］.J Biol Chem，2011，286（19）:270-280.

［8］XUE D，REN B W，XIANG J M，et al.PDCD4 as a predictor of sensitivity to neoad-juvant chemoradiotherapy in locally advanced rectal cancer patients［J］.Asian Pacific Journal of Cancer Prevention，2014，15（2）:825-830.

［9］唐炜，叶熹罡，高进，等.miR21及PDCD4在乳腺癌的表达及预后的关系［J］.广州医学院学报，2013，41（2）:33-37.

（张蕾编辑）

Expression and significance of PDCD4 in thyroid papillary cancer（TPC）*

Mao-yun Xie，Yao Huang，Jia-tao Peng，Xin-gen Wang，Li-wa Yu
（Affiliated Futian Hospital of Guangdong Medical College，Shenzhen Guangdong 518033，China）

Objective To investigate the expression and significance of PDCD4 in thyroid papillary cancer（TPC）. MethodsPDCD4 immunohistochemical expression was investigated in 62 cases of TPC，20 cases of paracarcinomatous normal tissue and 28 cases of benign thyroid tumor.Their relationship with clinical data was analyzed.Result The positive rate of PDCD4 protein was significantly lower in TPC than that in paracarcinomatous normal tissue and benign thyroid tumor（P＜0.05）.And with the decreasing of PDCD4 protein expression level，the malignant degree of TPC increased，which had statistically significant difference among groups（P＜0.05）.But the expression of PDCD4 protein had no relationship to lymph node metastasis（P＞0.05）.Conclusions The down-regulated expression of PDCD4 protein is correlated with the pathogenesis and development in TPC.

thyroid papillary cancer；PDCD4；immunohistochemistry

R736.1

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.16.010

1005-8982（2016）16-0049-03

2016-01-28

深圳福田区公益性科研项目（No：FTWS2014010）