李　杰,　张　陈,　张　维,　周正富

中国农业科学院生物技术研究所, 北京 100081



基于β-半乳糖苷酶为报告基因的耐辐射异常球菌启动子检测载体构建

李杰,张陈,张维,周正富*

中国农业科学院生物技术研究所, 北京 100081

耐辐射异常球菌是一种超强电离辐射抗性的微生物, 其含有大量的胁迫反应相关蛋白及其转录调控因子,在适应环境变化和各种胁迫反应中发挥着重要作用。为深入分析该菌的抗逆基因在不同胁迫下的功能，以β-半乳糖苷酶为报告基因构建了耐辐射异常球菌启动子检测体系。以耐辐射异常球菌基因组为模板扩增groEL、hsp20、relA和relQ启动子片段，将其连接到到大肠杆菌-耐辐射异常球菌穿梭载体pRADZ1上, 构建成具有启动子活性检测功能的重组质粒pRADZ-PgroE、pRADZ-Phsp20、pRADZ-PrelA和pRADZ-PrelQ，并将其转化至耐辐射异常球菌，测定β-半乳糖苷酶酶活。结果显示，这些启动子能在耐辐射异常球菌中启动Lac-Z报告基因的表达，并受到胁迫条件的诱导调控。耐辐射异常球菌启动子活性检测方法构建为该菌株特异性胁迫应答系统的研究提供了重要的实验基础。

β-半乳糖苷酶；启动子活性检测；耐辐射异常球菌；穿梭质粒pRADZ1

耐辐射异常球菌(Deinococcusradiodurans)具有超强的辐射、氧化[1]、高温、干旱等抗性[2]，被誉为“世界上最顽强的细菌”，极具研究和应用价值。1999年，美国科学家完成了该菌的全基因组测序工作，并发表于《科学》杂志上。其基因组中共包含 3 187个开放阅读框，其中仅1 493 个基因具有功能预测注释，超过半数的预测开放阅读框编码未知功能的蛋白[3]。……