饶群阳　徐基平　王　昊　刘成高　蔡春莲



养血透骨法对肺癌化疗后患者免疫功能影响的临床研究*

饶群阳徐基平王昊刘成高蔡春莲

湖南省衡阳市中医医院肿瘤Ⅱ科(衡阳 421001)

摘要：目的观察透骨法对肺癌化疗后患者免疫功能的影响。方法采用直接免疫荧光标记全血溶血法、流式细胞仪技术检测治疗前后肺癌化疗后患者外周血血清T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4/CD8、NK细胞及巨噬细胞水平。结果在提升肺癌化疗后患者免疫功能方面，治疗组明显优于对照组(P<0.01)。结论透骨养血法能明显提升肺癌化疗后患者的免疫功能，并能改善其化疗后的临床症状，提高肿瘤患者生存质量，毒副反应少，具有明显的疗效优势。

关键词：养血透骨法；肺癌化疗后；直接免疫荧光标记全血溶血法；流式细胞仪技术；免疫功能

肿瘤发病率逐年增加，治疗后复发率逐渐上升，研究表明恶性肿瘤患者普遍存在免疫功能低下[1]，接受化疗的肺癌病人免疫功能受损以细胞免疫功能受损为主[2]，细胞免疫在肿瘤免疫中发挥着重大的作用，分别由T淋巴细胞和B淋巴细胞组成，T淋巴细胞介导的细胞免疫又分为CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞，在机体的抗肿瘤免疫系统中占据着主导地位。肺癌化疗后患者免疫功能的抑制及下降导致治疗的失败，导致肿瘤的复发、转移以及免疫抑制，全身脏器功能衰竭而死亡。在2013年5月至2014年11月期间，笔者采用直接免疫荧光标记全血溶血法、流式细胞仪技术检测100例肺癌化疗后患者外周血血清T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4/CD8及NK细胞水平，研究养血透骨法对肺癌化疗后患者免疫功能的影响。

1　资料与方法

1.1一般资料患者来源均为我院2013年05月至2014年11月的肿瘤内科及呼吸内科肺癌化疗后的住院病人，共观察100例，按随机法分为治疗组和对照组两组，各为50例，治疗组中，男性28例，女性22例，年龄 19～76岁之间，平均年龄为(45.5±9.55)岁，病程在0.5～8年，平均病程为(3.5±2.2)年；对照组中男性29例，女性21例，年龄在33～74岁之间，平均年龄为(44.6±9.75)岁，病程在0.25～9年，平均病程为(3.8±2.0)年，两组患者在年龄、性别、病程均无统计学差异，具有可比性。

1.2诊断标准中医诊断标准参照：虚症参考标准[3]。 西医诊断标准依据《临床疾病诊断依据治愈好转标准》[4～5]。

1.3纳入标准[6](1)经病理学及细胞学确诊并住院接受化疗后，不愿或不再接受化疗的晚期肺癌化疗后病人。(2)心电图提示大致正常。(3)血生化(肝、肾功能)、凝血常规基本正常，白细胞在3.5×109/L以上，红细胞在6.0×1012/L以上，血小板在50×109/L以上的患者。小便常规基本正常，大便常规未见隐血，基本正常。(4)K氏评分在60分以上，预计寿命在3月以上的患者。

1.4观察方法采用单盲平行对照法观察，观察药物剂量、给药方法及疗程。

1.5治疗方法

1.5.1治疗组养血透骨法(衡阳市中医院协定方)，中药水煎服，每日1剂，三煎后分2次温服。

1.5.2对照组口服贞芪扶正颗粒(由通化修正药业公司生产，产品批号：001624 131121)，一次1包，冲服，一天2次。

1.5.3疗程2周为一疗程，观察1月(注：根据临床用药经验及回顾性研究确定)。

1.5.4服药方法每次均由住院部责任班护士将药物配成200ml的汤剂，端与病人口服，每日2次，两组患者服药时间及剂量相同。

1.6相关说明凡入选病例，观察及治疗期间仅采用与提升患者免疫力无关的相应的西医对症处理方法，并记录其具体用量。

1.7剔除标准患者中断观察研究在7天以上者，中途出现严重的肝肾功能、出血、心脏病、死亡等以及其他严重病症不能继续坚持研究的患者。

1.8观察指标(1)疗效性观察：①研究前后患者血生化、血常规、心电图等对比。②研究前后患者相关症状、体征、卡式评分标准(KPS)等对比。卡式评分标准[7]、临床症状疗效评定[5]。(2)研究指标(免疫指标)观察方法：①标本采集：在检查当天上午7：00至9：00采血，采血时间分别为：治疗前(一周内)，用药期间第15天(前后三天)，观察结束后(一周内)，每次抽血均检查2次取其平均值作为观察数据。每次采血2ml作为标本，乙二胺四乙酸二钾(EDTAK2)抗凝处理。②试剂与仪器：FACSARIA流式细胞仪(美国BECKMAN-COULTER公司)，型号为EPICS-XL。试剂由美国BECKMAN-COULTER公司统一提供，包括鼠抗人单抗克隆CD4-FITC/CD8-PE和CD3- PECY5等单克隆抗体。(3)检测方法：①细胞免疫的荧光标记，将鼠抗人单抗克隆CD4-FITC/CD8-PE和CD3- PECY5，加入抗凝全血0.1ml中，双标记抗体20μl，充分混匀后避光于温室孵育30min，使用免疫荧光制备仪进行红细胞裂解，温室避光15min后，使用流式细胞仪对各细胞亚群百分比进行检测。②流式细胞仪检测 使用BECKMAN-COULTER公司配套的Sy-stemⅡ系统软件数据处理系统处理数据，先进行光路流路的校准，校准后进行荧光补偿，然后上样本检测。

1.9统计学处理计量资料先进性方差齐性检验，方差齐则组内采用配对t检验(使用统计学软件SPSS18.0进行相关数据处理)，组间采用两样本比较的t检验。各组有效率比较采用radit分析及χ2检验。

2　结果

2.1T淋巴细胞亚群、NK细胞治疗前后变化的比较分析见表1。

表1　两组患者治疗前后T淋巴细胞亚群及NK细胞变化　(例，x±s)

注：*P<0.01，治疗后治疗组和对照组之间存在有显著性差异。提示：在提升肺癌化疗后患者免疫功能方面，治疗组明显优于对照组。

2.2各组患者临床症状疗效治疗前后变化的比较分析见表2。

表2　两组患者治疗后临床症状疗效变化　(例，%)

注：*P<0.01，治疗后治疗组和对照组之间存在有显著性差异。提示：在改善肺癌化疗后患者临床症状方面，治疗组明显优于对照组。

2.3两组患者KPS评分治疗前后均在60分以上，两组无显著性差异(P>0.05)。

3　讨论

研究表明，恶性肿瘤T细胞亚群较健康人减低[8～10]，而B 细胞影响较小，McMichael认为[11]T淋巴细胞作为细胞免疫调节的中心枢纽，Th和Ts细胞之间的平衡是通过CD4+和CD8+细胞之间的百分比表达出来的，其值下降表示免疫状态受抑制。目前研究还发现，CD4+细胞在协同杀伤肿瘤细胞中起着重要作用[12]，CD4+细胞数减少可使肿瘤细胞发生免疫逃逸[13～14]。中医药在增强剂机体免疫功能方面疗效显著，周立峰等[15]的研究表明，圣愈汤能纠正环磷酰胺所致的免疫低下小鼠T细胞亚群的异常，升高血液中IL-2及IL-4的含量，从而提高机体的免疫应答水平。黄梅等[16]研究证明，四君子汤可调整机体内细胞因子水平及功能状态，通过健脾补气增加脾的卫气功能从而调节免疫功能。

癌症的发病率日益上升，正成为人类第一致死原因。而化疗仍为临床肿瘤内科的基本手段，对于化疗引起患者免疫功能下降等最近成为研究热点，尤为突出。本课题取自曾广盛先生(湖南省第一批名老中医、全国第二批名老中医学术继承人指导老师)“病在气血以补益为本，以开窍为触机，二法同用方可补而不滞、令其气血生机盎然”的经验，选用枸杞子、当归、熟地黄、阿胶、黄芪、西洋参、牛黄、穿山甲、冰片等中药组方成透骨养血法。其功能为益气养血、开窍透骨、滋肾健脾，适用于癌症化疗后气虚血弱、免疫功能低下等，改善其临床症状，提高生存质量，通过实验室方法为临床提供依据，其中熟地黄滋阴补血、益精填髓；枸杞子滋补肝肾；阿胶补血止血、滋阴润燥；当归补血活血；共用以滋肾补血活血。西洋参补气养阴、清热生津；黄芪补气升阳健脾、托毒排脓、敛创生肌；二者养阴益气，配合补血药，以益气生血、养阴生津。穿山甲活血通经、搜风通络；牛黄清心、豁痰、开窍、熄风、解毒；冰片开窍醒神、清热解毒，三者共用芳香走窜，以开窍为动力，引诸药直达病所，以透骨为目的，直捣病所，补血与透骨两法合用，补益而不滋腻，散收结合，气血双补，肝脾肾兼顾，气血互资共补，共奏益气养血、开窍透骨之功，提升并激活患者血液免疫机制，达到提高免疫力，改善临床症状，提高患者生活质量，延长患者生存期的临床疗效。其立法、组方、治则紧扣癌症化疗后之气阴两虚、脾肾亏虚之病因病机，故而能效验于临床。

参考文献

[1]王润洁，胡红，黄芳，等.胃癌患者外周血淋巴细胞免疫功能的变化及临床意义[J].临床医学工程，2009,16(9)：26-28.

[2]吴昊.化疗肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群水平分析[J].Internal Medicine of China,Otc.2011.6(5):433-434.

[3]全国中西医结合虚证与老年病研究专业委员会.中医虚证辨证参考标准[M].中西医结合杂志，1986：198.

[4]中国人民解放军总后勤部卫生部.临床疾病诊断依据治愈好转标准[M]. 北京：人民军医出版社出版，1998：422.

[5]湖南省卫生厅，湖南省医院管理协会.常见疾病诊断依据与疗效判断标准[M].长沙：湖南科学技术出版社，1999.

[6]中华人民共和国卫生部.中药新药临床研究指导原则第一辑[S].中华人民共和国卫生部，1993：57-59.

[7]刘亚娴.中西医结合肿瘤学[M].北京：中国中医药出版社，2005：98.

[8]莫胜福，何伟佳.五行汇总刘患者外周血T淋巴细胞亚群的检测机意义[J].华夏医学，2007,6(20)：1295-1296.

[9]徐红，毛一香，张学光，等.晚期消化道肿瘤患者化疗前后T细胞亚群的变化[J].癌症，2008,27(4)：418-424.

[10]李焱，王士勇，于环，等.恶性肿瘤患者换药前后免疫功能状况及胸腺五肽等的调节作用[J].中华肿瘤防治杂志，2001,6(14)：924-927.

[11]Mc Michael. Monoclonal antibody in clinical medicine[J].Academic Press，1982，24(1):366.

[12]Ortalao JR，Mason A,Overton R. Lymphckine-actived kill cells:analysis of progernitors and effectors[J]. J Exp Med，1986，164:1193.

[13]苏燎原，徐映东，耿勇志，等.淋巴细胞亚群与免疫的初探[J].免疫学杂志，1992，8(4):251.

[14]付体辉.肿瘤的免疫逃避机制[J].国外医学肿瘤分册，1999，17(6):366.

[15]周立峰，邱玉华，程钢，等.圣愈汤对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠T细胞亚群和细胞因子的影响[J]，现代实用医学.2009，21(9)：805-813.

[16]黄梅，夏天，张仲梅，等.四君子汤对脾虚患者血浆细胞因子的影响[J].第四军医大学学报，2001，21(4)：411-413.

*基金项目：衡阳市科技局项目(No.S30)

doi:10.3969/j.issn.1003-8914.2016.01.008

文章编号：1003-8914(2016)-01-0016-03

收稿日期：(本文校对：周晓艳2015-01-05)