黄振杰　曾彤华　蔡文华　欧盛敬　陈文海　李斐



TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞间质转化及其机制探讨

黄振杰曾彤华蔡文华欧盛敬陈文海李斐

536000 广西北海市人民医院呼吸内科

【摘要】目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肺泡上皮细胞-间质细胞转化(EMT)过程及信号传导通路。 方法体外培养肺腺癌细胞系A549细胞，以TGF-β1进行干预；采用Western blot免疫印迹法检测干预前后细胞标志物蛋白及信号传导蛋白P-Smad2/3、Snail1、Snail2的表达；采用RT-PCR检测干预前后细胞标志物mRNA表达；采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化。 结果TGF-β1干预后，随着时间的延长，A549细胞上皮细胞标志物E-cad和CK19蛋白及mRNA表达下调(P<0.05)；间质细胞标志物α-SMA、Vimentin蛋白及mRNA表达上调(P<0.05)；信号传导蛋白P-Smad2/3、Snail1表达上调(P<0.05)；倒置相差显微镜观察TGF-β1干预后A549细胞由干预前的鹅卵石状变为梭形，如同肌纤维母细胞。 结论TGF-β1可诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化，其机制可能与P-Smad2/3、Snail1信号传导通路有关；TGF-β1可能是通过诱导肺泡上皮细胞间质转化的细胞效应，最终导致肺泡上皮细胞凋亡和纤维组织形成。

【关键词】肺纤维化；转化生长因子β1；A549细胞；上皮细胞间质转化；信号传导通路

肺纤维化是临床常见的呼吸疾病，其发病机制至今尚未完全清楚[1-3]。以往，多数观点认为其与进行性炎症导致的肺间质细胞激活增殖有关[4]。但近年来，越来越多的研究发现炎症不一定是诱导纤维化的必要条件，尤其是特发性肺纤维化及寻常型间质性肺炎[5]。近年来，肺泡上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)及其信号传导通路理论在肺纤维化中的作用逐渐获得认可[6]。本研究通过采用转化生长因子β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)诱导肺腺癌细胞系A549细胞发生EMT，旨在诠释和论证EMT是否为肺纤维化发病的一个重要的新模式。并探讨转化过程中信号传导途径的作用。

资料与方法

一、主要试剂

A549细胞株(中国典型培养物保藏中心)、胎牛血清、低糖DMEM培养基(Hyclone公司)、TGF-β1(Hyclone公司)、β-actin鼠抗人一抗、E-cad羊抗人一抗、CK19鼠抗……