董亚贤+尧慧燕+梁兵+钟高贤+刁芳明+石红婷

【摘要】 目的 比较不同靶向纳米材料作为基因载体的细胞毒性大小及其转染效率。方法 以聚乙烯亚胺（PEI）为对照， 化学合成髓鞘碱性蛋白68-86（MBP68-86）-多聚赖氨酸（PLL）-聚乙烯亚胺-聚乙二醇（PEG）接枝支化特异性配体乳铁蛋白 （Lf）及PLL-PEI-PEG， 并采用MTT法检测细胞毒性， 倒置显微镜荧光观察法和流式细胞仪法检测转染效果。结果 MBP68-86-PLL-PEI-PEG-Lf细胞毒性比PLL-PEI-PEG及PEI低， 三组两两比较差异有统计学意义（P<0.05）；MBP68-86-PLL-PEI-PEG-Lf/pAAV-EGFP 的转染效率为（41.8±0.9）%；PLL-PEI-PEG/pAAV-EGFP的转染效率为（28.4±1.1）%；PEI/pAAV-EGFP 为的转染效率（20.5±1.2）%， 两两比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 MBP68-86-PLL-PEI-PEG-Lf和PLL-PEI-PEG可作为基因转染的传输载体， 其中MBP68-86-PLL-PEI-PEG-Lf最好。

【关键词】 纳米材料； MBP68-86-PLL-PEI-PEG-Lf；基因载体；PLL-PEI-PEG

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.20.193

目前所有的基因治疗研究领域， 都存在转基因载体系统在转染效率、定向性、可控性、安全性等方面的不足[1]。而纳米载体凭借其低毒、高效负载等优点在基因治疗中发挥越来越重要的作用。作者前期实验已经成功合成并验证了PLL-PEI-PEG[2] 。因此， 本文在前期实验的基础上合MBP68-86-PLL-PEI-PEG-Lf， 并在体外比较不同新型靶向纳米材料的细胞毒性和转染效率， 以筛选出更加高效、低毒和高靶向性的基因载体， 为神经系统的基因治疗带来新的希望。

1 材料与方法

1. 1 细胞来源及培养 大鼠单个核细胞（PBMC）购自美国ATCC公司， 由本实验室保存。采用加有10% 胎牛血清（FBS）和1%抗生素（青霉素/链霉素）的DMEM培养基培养。

1. 2 PLL-PEI-PEG-Lf/MBP68-86的制备 MBP68-86用Traut试剂硫酸化后再与纳米材料以分子比4∶1混合， 在室温下反应1h， 去除过剩的MBP68-86。

1. 3 质粒DNA（pDNA）的制备 质粒在大肠杆菌中扩增， 然后用质粒提取试剂盒提取纯化。得到的质粒通过紫外分光光度计检测其纯度和浓度。检测合格的质粒保存于-20℃保存备用。

1. 4 MBP68-86-PLL-PEI-PEG-Lf/质粒DNA复合物的制备 在Eppendorf管中， 将……