周志义，张佑红，耿安丽

(武汉工程大学化工与制药学院，湖北 武汉 430073)



紫外诱变筛选柄篮状菌尿嘧啶缺陷型菌株

周志义，张佑红，耿安丽

(武汉工程大学化工与制药学院，湖北 武汉 430073)

摘要：柄篮状菌EMM是一株从原始菌OPC4诱变获得的高产纤维素酶菌株。为了获得转化用的宿主菌，通过紫外诱变的方法，在1.5 g·mL-15-FOA的筛选压力下，从EMM诱变得到一株尿嘧啶营养缺陷型菌株EMU6。从原始菌OPC4的基因组里克隆出2 553 bp的pyrF基因，NCBI比对发现，pyrF为编码乳清酸磷酸核糖基转移酶的基因，影响尿嘧啶的合成。测序比对发现，尿嘧啶营养缺陷型菌株EMU6的pyrF基因在1 160 bp处有一个核苷酸缺失。柄篮状菌尿嘧啶营养缺陷型菌株的获得使基于pyrF基因转化体系的建立成为可能。

关键词：柄篮状菌；尿嘧啶营养缺陷型；PEG/CaCl2转化法；pyrF；紫外诱变

木质纤维素是世界上最丰富的生物能源材料，大量的糖类以纤维素和半纤维素的形式存在其中，因而成为生物乙醇生产最有潜力的来源[1-2]。相较于其它生物能源材料，木质纤维素生产生物乙醇的最大优势是不会消耗粮食[3]。木质纤维素生产生物乙醇的第一步是将其水解成单糖，常用的方法有2种：化学处理和酶处理。化学处理所用的试剂会污染环境且处理不充分，酶处理则不需使用其它化学试剂而且环保[4-5]。水解木质纤维素的酶主要有纤维素酶和半纤维素酶，这两种酶的高成本制约着酶处理在工业上的广泛应用[6]。

本课题组从自然界中分离出柄篮状菌OPC4，经多次诱变得到纤维素酶高产菌EMM，优化了其发酵条件。……