陈东亮孙化雨李利超赵韩生高志民（1北京市农林科学研究院北京农业生物技术研究中心北京100097 国际竹藤中心国家林业局竹藤科学与技术重点实验室北京10010）



麻竹DlSCL6基因amiRNA前体合成及表达载体构建

陈东亮1，2孙化雨2李利超2赵韩生2高志民2
（1北京市农林科学研究院北京农业生物技术研究中心北京100097 2国际竹藤中心国家林业局竹藤科学与技术重点实验室北京100102）

Web MicroRNA Designer（WMD3）是一个专门应用于植物人工miRNA设计和前体序列设计的专业网站，其中利用重叠PCR法合成amiRNA前体序列，涉及多个PCR和纯化回收过程，步骤繁琐，周期较长。本研究利用WMD3设计了麻竹转录因子DlSCL6基因的人工miRNA序列和其前体序列，采用改进的重叠PCR方法，快速克隆获得了该前体序列，并以改造的pCMABIA1301载体为框架，构建了该前体的植物表达载体，为进一步研究利用amiRNA调控SCL6基因的表达奠定了基础。

麻竹；人工miRNA；重叠PCR；表达载体构建

microRNA（miRNA）是一类生物内源的小分子非编码RNA，广泛存在于动物、植物和微生物中。miRNA调控是基因表达转录后层面的重要调控方式之一，研究表明miRNA在植物的生长发育、物质代谢、信号转导以及抗逆等多种生理生化过程中发挥重要功能［1-3］。人工 miRNA （artificial miRNA，amiRNA）是通过模拟天然miRNA结构特点、作用机制，设计出一段与目标基因高度匹配的序列，利用分子生物学技术将其转入植物体内并使其表达，而达到对该基因抑制调控的目的。amiRNA的有效性已经在拟南芥 （Arabidopsis thaliana）、杨树 （Populus trichocarp）、水稻 （Oryza sativa）等十几种植物的数十个基因中得到验证［4-7］。

2009年，Weigel等发布了 WMD3软……