王薛婷，郭强强，蔡艺钦，陈志福，李健，刘静雯*

(1.集美大学 食品与生物工程学院，福建 厦门361021)



海洋球石藻(Emiliania huxleyi)通用表达载体的构建与电转化

王薛婷1，郭强强1，蔡艺钦1，陈志福1，李健1，刘静雯1*

(1.集美大学 食品与生物工程学院，福建 厦门361021)

摘要：海洋球石藻Emiliania huxleyi是一种全球广泛分布的真核浮游植物，该种不仅是海洋碳、硫循环和全球气候变化的重要指示物种，而且能够产生丰富的次级代谢生物活性物质，在生物技术领域也具有很好的应用前景。本文通过分析氨苄青霉素、卡那霉素、G418、氯霉素、链霉素、新生霉素及嘌呤霉素等7种常用抗生素对海洋球石藻生长的影响，确定G418可作为该藻阳性转化藻株的抗性筛选试剂，其对应的抗性基因neo则作为该藻表达载体构建中的抗性筛选标记。在此基础上克隆了绿色荧光蛋白基因gfp、抗性标记基因neo及E. huxleyi BOF92内源性岩藻黄素-叶绿素a/c结合蛋白基因的启动子fcp，以pUC18为基础载体，构建了pUC18-fcp-gfp和pUC18-fcp-neo两个重组表达载体，以电转化方法共转化球石藻细胞并结合选择性固体培养基筛选，成功获得了被转化的球石藻细胞。海洋球石藻遗传转化系统的建立为进一步开展该种相关的基础生物学研究及其在生物技术领域的应用奠定了基础。

关键词：海洋球石藻；通用表达载体；neo标记基因；电转化

1引言

海洋微藻是海洋生物的重要饵料来源之一，具有种类多、繁殖快、数量大等特点，是海洋生物资源的重要组成部分。许多海洋微藻能够产生丰富的次级代谢活性物质，可用于食品、医药、能源及化工领域，特别是有些海洋微藻细胞中总脂类的含量可高达80%(干质量)，在脂类生物活性物质及能源开发利用中具有很好的前景和优势[1—4]。……