赵娜　刘金霞　孙殿兴

050082 石家庄，中国人民解放军白求恩国际和平医院全军肝病诊治中心(赵娜、孙殿兴)； 067000，承德医学院病原生物学实验中心(刘金霞)



·技术方法·

反转录环介导等温扩增技术检测甲型H1N1流感病毒的建立

赵娜刘金霞孙殿兴

050082 石家庄，中国人民解放军白求恩国际和平医院全军肝病诊治中心(赵娜、孙殿兴)； 067000，承德医学院病原生物学实验中心(刘金霞)

【摘要】目的 通过应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)对甲型H1N1流感病毒进行基因检测，建立一种快速、简便的可视化核酸检测技术。 方法 先针对甲型H1N1流感病毒HA基因区段，设计2对RT-LAMP引物。通过检测不同病毒评估引物的特异性，通过检测倍比稀释的临床样本确定RT-LAMP的灵敏度。用羟基萘酚蓝(HNB)染料对产物进行可视化检测，同时用凝胶电泳进行结果验证。最后用RT-LAMP检测临床样本，使用卡方检验比较与TaqMan PCR的一致性。 结果RT-LAMP的引物特异性好，可准确地使甲型H1N1流感病毒扩增。通过对稀释模板的检测，得出RT-LAMP的灵敏度为2.5×103拷贝/ml。RT-LAMP扩增结果可通过HNB可视化判定，与凝胶电泳的效果相当。对RT-LAMP和TaqMan PCR的显著性差异经统计学评价，可知二者一致性较好(P>0.05)。结论本研究实现了可视化检测甲型H1N1流感病毒，具有更好的灵敏性，该技术在基层医疗机构有一定的实用价值。

【主题词】甲型H1N1流感病毒；反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)；可视化

Fund program: Medicine and Hygiene Research Foundation of the Whole Army (CBJ 14C010)

甲型H1N1流感病毒(简称甲流)为单股负链RNA病毒,属于正粘病毒科,主要通过呼吸道传播，传播快，感染率高。人感染甲流后的早期症状与普通流感相似，包括发热、咳嗽、喉痛、头痛、全身肌肉痛、鼻塞流涕等[1]。2……