徐愿 孔维萍 陶庆文 杨文雪 金玥 阎小萍

中日友好医院中医风湿病科，免疫炎性疾病北京市重点实验室，北京 100029

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是一种慢性炎性疾病，主要侵犯骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织及外周关节，并可伴发关节外表现[1]。多数AS患者在疾病后期继发韧带、纤维环、关节软骨、关节囊的病理性成骨，使脊柱逐渐失去柔软度，造成脊柱强直和关节畸形。在AS中表现为附着点和滑膜关节、软骨结合处形成新骨[2]。这种结构损伤很难逆转，往往导致AS患者脊柱活动受限及关节功能降低，轻者出现下蹲、弯腰、转头等受限，重者行动困难，晚期出现关节屈曲挛缩、畸形或强直，严重影响患者的关节功能和生活质量，给家庭和社会造成沉重的负担[3]。目前普遍认为，AS的病理性成骨主要通过两种方式：软骨内成骨和膜内成骨。①软骨内成骨的过程为骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)通过聚集和分化形成软骨细胞，经过增生、成熟、分化和凋亡，最后形成骨组织。研究表明软骨内成骨是AS骨赘生成的主要形式[4]。②膜内成骨则是BMSCs直接分化为成骨细胞。膜内成骨可能与AS脊柱纵韧带钙化有关[4]。Wnt/β-catenin通路是调节这两种成骨过程的最重要的分子机制，本研究观察补肾强督方对BMSCs 的Wnt/β-catenin通路的作用，为中医治疗AS提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 细胞分化培养

人BMSCs(购自Sciencell，货号：7500)分为空白对照组、西药对照组、补肾强督方低、中、高剂量组。各组细胞分别于MSCM (含 100 U/mL 青霉素、100 U/mL 链霉素、5%胎牛血清)中进行培养。将人骨髓间充质干细胞分别按照1×105/孔的密度接种于100 mm平皿中，每皿加入不同组全培养基6 mL；……