姜宇 阎一林 朱国兴* 徐又佳

1. 南京医科大学附属无锡市第二人民医院，骨科 214000 2. 美国俄勒冈州立大学 3. 苏州大学附属第二医院骨科

铁过载可能是骨质疏松症的独立危险因素[1]，高铁环境对成骨细胞有抑制的作用[2]，而铁过载对于成骨代谢影响的具体机制目前尚不明确。随着第二代测序技术的迅猛发展，科学界也开始越来越多地应用第二代测序技术来解决基因和机制上的问题[3]。主要原理是通过进行全基因组的深度测序，在基因组水平上扫描并检测不同位点，发现个体差异的分子基础。我们利用枸橼酸铁铵(FAC)造成高铁环境，将斑马鱼生活在高铁环境造成其铁过载的模型[4]。运用高通量测序发现Bmp2(骨形态发生蛋白2)基因受到抑制，通过体内以及离体的一系列实验证实铁过载对Bmp2通道的抑制作用。

1 材料和方法

1.1材料

聚合链式反应基因扩增仪，MicroCL 17离心机；Step One Plus荧光定量PCR仪；GL212pro凝胶成像系统；SZ61体视显微镜。

1.2斑马鱼胚胎的收集

野生型斑马鱼(TUB ABC)取自苏州大学生物钟研究中心。按照Zebrafish Book的描述进行饲养和产卵。下午喂食半小时后设置斑马鱼交配盒，每盒中放入一雌一雄两条鱼，中间用透明挡板隔开。次日上午9:00抽去隔板，30～35min后用滤网收集鱼卵并洗去杂物。

1.3枸橼酸铁铵干预试验

挑选受精后第二天已破膜孵出的斑马鱼幼鱼，至于合适的浓度[4]的枸橼酸铁铵(FAC)的培养皿中，每盘随机放鱼20尾，采用静水式换水补药法，每隔12小时换试液。

1.4高通量测序

RNA-seq序列是由信使核糖核……