金鑫 朱立国 李秀兰 贾建 张扬 孙晓雷 马剑雄 李风波 马信龙*

1. 天津市天津医院骨科研究所，天津 300211 2. 中国中医科学院，北京 100102

褐藻多糖硫酸酯是一类从海带中提取的天然硫酸化多糖，其主要成分为褐藻糖、硫酸根以及少量糖醛酸、半乳糖和木糖。国内外大量研究表明，褐藻糖胶具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗病毒、抗凝血、抗氧化等[1]。骨重建是成骨细胞与破骨细胞共同参与的过程，骨形成与骨吸收的失衡是导致骨质疏松症和骨硬化症等疾病的重要病因。成骨细胞参与骨形成，破骨细胞参与骨吸收。因此，破骨细胞的凋亡直接影响骨吸收，从而影响骨重建过程。大量研究证实柚皮苷可以促进成骨细胞的增值、分化成熟；提高骨密度、提升骨骼力学性能，防治去势大鼠骨质疏松[2-4]。但褐藻糖胶对破骨细胞凋亡的影响尚未见报道，本实验通过在体外LMWF对RANKL诱导的成熟破骨细胞的作用，观察LMWF对破骨细胞凋亡的影响以及其机制，为LMWF抗骨质疏松在破骨细胞方面提供理论支持。

1 材料和方法

1.1 药品与试剂

小鼠单核细胞RAW264.7细胞株(中国协和医科大学基础医学细胞中心)；褐藻糖胶，(Sigma公司)；牛皮质骨(自制)；小鼠重组可溶性核因子кB受体活化因子配体(sRANKL)(Peprotech公司)；capsase-3活性测试试剂盒(南京碧波公司)；抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒(Sigma公司)；高糖DMEM培养基、10%胎牛血清(Gibco公司)；胰蛋白酶、乙二胺四乙酸二钠(Sigma 公司)；磷酸盐缓冲液(PBS)、D-hank’s液(自制)；All-in-OneTM qPCR Mix、All-in-OneTM qPCR Primer (美国 GeneCopoeia公司)。

1.2 仪器

扫描电子显微镜；细胞培养皿(Corning 公司)；倒置相差显微镜、CX-21 光学显微镜(日本Olympus 公司)；……