李翠娟，刘子瑄，孙理军，巩振东

陕西中医药大学，陕西 咸阳 712046

“正常体质-肾虚体质-肾虚证候”唾液生化指标变化研究

李翠娟，刘子瑄，孙理军，巩振东

陕西中医药大学，陕西 咸阳 712046

目的探讨“正常体质-肾虚体质-肾虚证候”动态演变过程中唾液生化指标的变化。方法24只3月龄SD大鼠，雌雄各半，分组配对合笼，使雌鼠受孕。将孕鼠随机分为Ⅰ、Ⅱ组，每组6只。Ⅰ组孕鼠孕期不恐吓，正常喂养，分娩后随机抽取20只雌雄各半仔鼠作为正常对照组和肾虚证候组，每组10只。Ⅱ组孕鼠从妊娠第2日开始给予恐吓，直到仔鼠出生，随机抽取10只雌雄各半仔鼠作为肾虚体质组。各组仔鼠正常条件喂养6周后，肾虚证候组每日肌肉注射氢化可的松25 mg/kg体质量，正常对照组和肾虚体质组注射等量生理盐水，连续10 d。观察各组大鼠唾液生化指标变化。结果与正常对照组比较，肾虚体质组、肾虚证候组大鼠唾液pH值升高（P＜0.01）；肾虚体质组大鼠唾液肌酸激酶（CK）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）降低，钾（K）、磷（P）、总蛋白（TP）、唾液淀粉酶（AMY）升高；肾虚证候组大鼠CK、ALT、AST、ALP、乳酸脱氢酶（LDH）降低，K、P、TP、AMY升高（P＜0.05，P＜0.01）。与肾虚体质组比较，肾虚证候组大鼠唾液LDH活性下降（P＜0.05）。结论肾虚体质组与肾虚证候组大鼠唾液成分发生变化。

正常体质；肾虚体质；肾虚证候；唾液生化指标；大鼠

体质是在先天遗传和后天获得因素作用下所形成的人类个体在形态结构、生理功能和心理活动方面所固有的、相对稳定的特性。体质与疾病之间有着密切的联系，正常体质表现为健康状态，病理体质表现为亚健康状态。我们在长期对体质理论研究中发现，体质决定健康状况，人体之所以表现为亚健康状态，是因为病理体质的存在，从健康到亚健康再到疾病的过渡，关键是体质的改变。疾病的发展过程首先是从生理体质向病理体质过渡，再向病证发展的动态演变过程，亦即常常呈现出“正常体质-病理体质-病理证候”的动态演变过程［1］。

肾虚体质是临床最常见的病理体质类型之一，与多种慢性疾病和老年性疾病密切相关。临床上在“正常体质-肾虚体质-肾虚证候”这一动态演变过程中，肾之功能的异常变化，会影响到多脏腑的功能活动和体内物质代谢过程，并最终在代谢产物中体现出来［2］。中医理论认为，唾液作为人体津液的一部分，其生成和排泄除与脾有关外［3］，与肾也密切相关。现代研究发现，唾液成分的改变与多种疾病的发生有着密切的关系［4］。而唾液检测较血液检测更安全方便，而且无创伤、无血源性疾病传播的危险，患者更易于接受，因而受到人们越来越多的关注［5］。本实验通过制作肾虚体质和肾虚证候动物模型，探讨“正常体质-肾虚体质-肾虚证候”动态演变过程中唾液生化指标的变化。

1 实验材料

1.1 动物

3月龄SD大鼠24只，雌雄各半，体质量180～200g，西安交通大学实验动物中心，许可证号SCXK（陕）2012-002。分笼饲养于SPF级动物实验室，自由饮食饮水。

1.2 药物

匹鲁卡品，山东博士伦福瑞达制药有限公司，批号20130803；氢化可的松，美国Sigma公司。

1.3 主要试剂与仪器

生化指标试剂盒，日本Olympus公司。台式数显pH仪（上海三信），全自动生化分析仪（Au2700，日本Olympus），医用低温冰箱（MDF-330，日本Olympus），低温高速离心机（德国Eppendorf Centrifuge）。

2 实验方法

2.1 造模及分组

将大鼠适应性喂养1周后，分组配对，合笼，次日早晨检查雌鼠有无阴栓以判断是否受精，未见阴栓的雌鼠再次与雄鼠合笼，反复2次，确保雌鼠均受精，分笼饲养。1周后观察，雌鼠体质量变化明显，有垒窝现象，活动减少。将12只体质量（200±20）g孕鼠随机分为Ⅰ、Ⅱ组。Ⅰ组6只孕鼠孕期不恐吓，正常喂养，分娩后随机抽取 20只仔鼠作为正常对照组和肾虚证候组，每组10只，均雌雄各半。Ⅱ组6只孕鼠从妊娠第2日开始给予恐吓，每日9∶00-11∶00、14∶00-16∶00，将孕鼠放入特制的小铁丝笼内，再将此小笼固定在装有一只大家猫（具有威慑力的土猫）的大笼中，让猫与孕鼠仅一网之隔，使猫爪能碰到但无法抓到孕鼠，并于每日10∶00、15∶00各另取2只活的实验淘汰大鼠喂猫，直至仔鼠出生，由此使模型孕鼠惊恐伤肾造成仔鼠先天不足，制作先天不足肾虚体质动物模型，随机抽取 10只雌雄各半仔鼠作为肾虚体质组。各组仔鼠正常条件喂养6周后，肾虚证候组参照文献［6］，每只每日肌肉注射氢化可的松25 mg/kg体质量，正常对照组和肾虚体质组注射等量生理盐水，连续10 d。

2.2 取材

造模结束称重后停药，所有动物乙醚麻醉，腹腔注射0.2%匹鲁卡品（0.75 mg/100g）促进唾液分泌，Eppen-dorf管收集大鼠唾液，14 000 r/min离心10 min收集上清液，-80 ℃冰箱保存备用。

2.3 指标检测

观察大鼠体质量、神态、活动能力、进食、饮水、毛色等一般情况变化。pH仪测定大鼠唾液pH值，应用全自动生化分析仪测定大鼠唾液生化指标。

3 统计学方法

4 结果

4.1 一般状况

正常对照组大鼠皮毛色白光亮润泽，反应灵敏，饮食饮水量正常，活动正常。肾虚体质组仔鼠在出生时即表现为体积较小，6周后肾虚体质组仔鼠体质量明显轻于其他组，身长相对较短，毛发稀疏，易惊，食量较小。肾虚证候组大鼠注射氢化可的松后出现体质量减轻、活动明显减少、食量下降、反应迟钝、蜷曲、拱背和体毛稀疏等症状，个别出现掉毛现象。

4.2 各组大鼠唾液pH值检测结果

与正常对照组比较，肾虚体质组、肾虚证候组唾液 pH值明显升高（P＜0.01），2组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表1。

表1 各组大鼠唾液pH值比较（±s）

表1 各组大鼠唾液pH值比较（±s）

注：与正常对照组比较，△△P＜0.01

组别 只数 pH值正常对照组 10 4.20±0.10肾虚体质组 10 9.16±0.06△△肾虚证候组 10 9.15±0.09△△

4.3 各组大鼠唾液钠、钾、氯、钙、磷检测结果

与正常对照组比较，肾虚体质组和肾虚证候组大鼠唾液钾（K）、磷（P）浓度升高（P＜0.01）；肾虚证候组大鼠唾液中氯（Cl）浓度降低（P＜0.05）；肾虚体质组、肾虚证候组大鼠唾液钠（Na）浓度呈下降趋势、钙（Ca）浓度呈上升趋势。结果见表2。

4.4 各组大鼠唾液肌酸激酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶、唾液淀粉酶检测结果

与正常对照组比较，肾虚体质组和肾虚证候组大鼠唾液肌酸激酶（CK）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）活性降低，唾液淀粉酶（AMY）活性升高（P＜0.05，P＜0.01），乳酸脱氢酶（LDH）活性降低，但只有肾虚证候组差异有统计学意义（P＜0.01）；与肾虚体质组比较，肾虚证候组大鼠唾液LDH活性降低（P＜0.05）。结果见表3。

表2 各组大鼠唾液钠、钾、氯、钙、磷浓度比较（±s，mmol/L）

表2 各组大鼠唾液钠、钾、氯、钙、磷浓度比较（±s，mmol/L）

注：与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

组别 只数 Na K Cl Ca P正常对照组 10 31.60±9.91 21.14±2.02 31.80±5.53 0.41±0.80 0.30±0.43肾虚体质组 10 29.09±7.11 25.13±2.47△△ 28.38±3.91 0.73±0.75 0.84±0.34△△肾虚证候组 10 26.69±5.36 26.19±1.81△△ 27.72±4.28△ 0.78±0.66 0.85±0.81△△

表3 各组大鼠唾液CK、ALT、|AST、ALP、LDH、AMY活性比较（±s，IU/L）

表3 各组大鼠唾液CK、ALT、|AST、ALP、LDH、AMY活性比较（±s，IU/L）

注：与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与肾虚体质组比较，☆P＜0.05

组别 只数 CK ALT AST ALP LDH AMY正常对照组 10 3.62±1.91 6.40±2.27 10.82±7.33 20.20±22.44 11.26±4.40 9.33± 9.47肾虚体质组 10 1.69±1.06△ 3.10±2.23△△ 4.50±2.22△ 3.69± 4.48△ 6.52±7.32 123.43±113.80△肾虚证候组 10 0.31±0.54△△ 1.81±1.23△△ 3.03±1.25△△ 3.32± 5.51△ 2.10±1.25△△☆ 187.67±144.57△△

4.5 各组大鼠唾液血糖、胆固醇、三酰甘油及总蛋白检测结果

与正常对照组比较，肾虚体质组和肾虚证候组大鼠唾液总蛋白（TP）含量明显升高（P＜0.01），血糖（GLU）、胆固醇（CHOL）、三酰甘油（TG）含量均降低，但差异均无统计学意义（P＞0.05）。结果见表4。

表4 各组大鼠唾液GLU、CHOL、TG、TP含量比较（±s）

表4 各组大鼠唾液GLU、CHOL、TG、TP含量比较（±s）

注：与正常对照组比较，△△P＜0.01

组别 只数GLU/（mmol/L）CHOL/（mmol/L）TG/（mmol/L）TP/（g/L）正常对照组 10 0.03±0.05 0.05±0.08 0.05±0.06 2.78±2.32肾虚体质组 10 0.03±0.02 0.02±0.04 0.04±0.02 9.44±3.62△△肾虚证候组 10 0.01±0.02 0.02±0.04 0.03±0.03 7.56±3.63△△

5 讨论

越来越多的研究发现，唾液和血液、尿液一样，如同人体的一面镜子，可以用来反映人体的健康状况，作为一种检测手段来进行疾病的诊断，加之唾液的采取收集操作容易，无损伤，无风险，可成为许多疾病的辅助诊断工具［7］。因此，唾液检测越来越受到人们的青睐。

根据中医“肾在液为唾”的理论，利用唾液与肾的相关性，从唾液的生化指标变化研究肾及其相关疾病具有重大而长远的意义和价值。相关研究也表明，在肾脏疾病中，唾液腺的分泌功能会减退，唾液的pH值及相关生化指标等会发生相应的变化［8-9］。如有学者研究发现，与健康组比较，肾功能受损时药物刺激条件下和非刺激条件下唾液腺的分泌量会下降，非刺激条件下唾液的pH值和缓冲容量会上升，药物刺激条件下的唾液的pH值和缓冲容量2组间比较无明显差异［10］。本实验结果显示，与正常对照组比较，肾虚体质组、肾虚证候组大鼠唾液pH值明显升高。

唾液的电解质成分随流量而变，正常人唾液与血液相比，含有高浓度的K和无机P，Na和Cl浓度相对较低。郭氏等［11］研究发现，在慢性肾炎肾虚状态下，唾液中K离子浓度升高，Na离子浓度降低。本实验结果显示，与正常对照组比较，肾虚体质组和肾虚证候组大鼠唾液 K、P、Ca浓度呈升高趋势，Na、Cl浓度呈下降趋势，说明伴随着肾虚状态的出现，唾液中的离子成分发生了变化。

唾液中除含有无机盐外，还含有AMY、溶菌酶、黏蛋白、黏多糖等丰富的有机物，这些物质在促进消化、抵御口腔细菌、病毒感染及口腔防御系统中发挥着至关重要的作用。因此，本研究还观察了肾虚体质、肾虚证候AMY、GLU、TG、CHOL、TP等变化，结果发现肾虚体质组和肾虚证候组大鼠唾液CK、ALT、AST、ALP均明显低于正常对照组，TP、AMY均明显高于正常对照组，而且肾虚证候组大鼠唾液 LDH也明显低于正常对照组。提示在肾虚体质与肾虚证候不同的肾虚状态下，大鼠唾液中的成分确实发生了变化，且与正常对照组有明显差异，进一步说明了“肾在液为唾”理论的科学性，为中医肾藏象理论的现代化研究提供了客观依据。

疾病的发生常常呈现出“正常体质-病理体质-病理证候”的动态演变过程。肾虚体质是临床最常见的病理体质类型之一。肾虚体质之人，由于肾虚精衰，骨髓、脑髓亏虚不足，常常表现出骨骼痿软、腰酸乏力、头晕、记忆力下降等症状，成为多种慢性疾病和老年性疾病肾虚证候发生的内在基础。本研究也发现，与肾虚体质组比较，肾虚证候组大鼠唾液 LDH活性降低，二者之间存在差异，其机理有待进一步深入研究探讨。这一研究将有助于寻找肾藏象相关疾病早期诊断的生物标志物，探索其预防靶标，为临床开展肾藏象相关疾病无创伤诊断技术和早期防治研究奠定基础。

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Research on Saliva Biochem ical Changes about “Normal Constitution - K idney Deficiency Constitution - K idney Deficiency Syndrome”

LI Cui-juan， LIU Zi-xuan， SUN Li-jun， GONG Zhen-dong
（Shaanxi University of Chinese Medicine， Xianyang 712046， China）

ObjectiveTo investigate the changes of saliva biochemical parameters in the dynamic evolution of“normal constitution - kidney deficiency constitution - kidney deficiency syndrome”.MethodsTotally 24 male and female SD rats of 3 months old （12 male rats and 12 female rats） were put in packet pair cage. Pregnant rats were random ly divided into Ⅰ and Ⅱ groups， 6 rats in each group. Ⅰ group was without intimidation during pregnancy， with normal feeding， and then after the birth， 20 rats were random ly selected as normal control group and kidney deficiency syndrome model group， 10 rats in each group， half male and half female. Ⅱ group， from gestation day 2， was given intimidation until postnatal. 10 half male and half female rats were random ly selected as model group of kidney deficiency constitution. Rats in each group

normal feeding conditions for 6 weeks. The kidney deficiency syndrome model group was given intramuscular injection of hydrocortisone 25 mg/kg body weight every day， while normal control group and kidney deficiency constitution model group were injected with the same amount of normal saline for 10 consecutive days. The changes of salivary biochemical parameters were observed in each group of rats.ResultsCompared with the normal control group， salivary pH in the kidney deficiency constitution group and kidney deficiency syndrome group significantly increased （P＜0.01）. CK， ALT， AST， ALP levels in the kidney deficiency constitution group were reduced， but the contents of K， P， TP， AMY increased. The levels of CK，ALT， AST， ALP and LDH in the kidney deficiency syndrome decreased， while the contents of K， P， TP， and AMY increased （P＜0.05，P＜0.01）. Compared with the kidney deficiency constitution group， the content of LDH in the kidney deficiency syndrome group decreased （P＜0.05）.ConclusionRat saliva composition changes did occur in the kidney deficiency constitution group and kidney deficiency syndrome group.

normal constitution； kidney deficiency constitution； kidney deficiency syndrome； saliva biochemical index； rats

10.3969/j.issn.1005-5304.2016.06.013

R228

A

1005-5304（2016）06-0047-04

2015-07-23）

（

2015-09-17；编辑：华强）

国家自然科学基金（81202614）；陕西省自然科学基础研究计划（2015JQ8291）；陕西省教育厅重点实验室科研计划（13JS032）