一起猪伪狂犬与猪圆环病毒病混合感染的诊断

2016-07-28郝志香河南省新乡市动物疫病预防控制中心河南省新乡市动物卫生监督所河南新乡453000

甘肃畜牧兽医 2016年4期

郝志香，李　乐，马　健，鲁　毅（.河南省新乡市动物疫病预防控制中心；.河南省新乡市动物卫生监督所，河南新乡 453000）

郝志香1，李乐2，马健1，鲁毅1
（1.河南省新乡市动物疫病预防控制中心；2.河南省新乡市动物卫生监督所，河南新乡 453000）

摘要：2015年9月新乡市某猪场发生一起猪死亡率的40％的传染病，病猪精神不振，食欲减退，体温升高至40℃，站立不起，皮肤有圆形坏死灶，抗生素治疗无效，发病率100％。通过流行病学调查，并对其进行病理剖检、实验室诊断，确诊为该猪场育肥猪是由猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型混合感染引起的发病和死亡。

关键词：猪伪狂犬病；猪圆环病毒病；混合感染

猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的猪的急性传染病。该病在猪呈爆发性流行。引起妊娠母猪流产、死胎，公猪不育，新生仔猪的大量死亡，育肥猪呼吸困难、生长停滞等，是危害全球养猪业的重大传染病之一。猪圆环病毒病（porcine circovirus diseases，PCVD)是由猪圆环病毒2型引起的一种传染病，是断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎肾病综合征（PNDS）、猪呼吸系统混合疾病、繁殖障碍综合征等与PCV-2相关的疾病统称。PCV-2及其相关的猪病，死亡率10％～30％不等，较严重的猪场在暴发本病时死淘率高达40％，给养猪业造成严重的经济损失。PCV-2感染可引起猪的免疫抑制，从而使机体更易感染其他病原，这也是圆环病毒与猪的许多疾病混合感染有关的原因。

1　流行病学调查

该猪场共养殖有100日龄生猪200头，起初个别生猪发病，一周后陆续感染，精神不振，食欲减退，体温升高至40℃，呼吸急促，站立不起，皮肤有圆形坏死灶，抗生素治疗无效，发病率100％，死亡率40％。初步怀疑感染病毒。

2　病理变化

剖解病死仔猪发现，关节水肿有积液，胸腹腔有积液和粘连，全身淋巴结周边有出血且肿大，肺部和肾脏有出血点和黄褐色斑点，肝、脾肿大，有灰白色坏死灶，肌肉褪色，盲肠和结肠部位淤血并有出血点。

3　实验室诊断

3.1样品采集与处理

采集解剖死亡猪后的组织（脾、肺、肝、肾、扁桃体及腹股沟淋巴结）样品2份，加入少许PBS液稀释研磨，在-70℃反复冻融3次后，4℃下12 000 rpm离心5 min，取上清置-20℃保存备用。

3.2核酸提取

核酸提取采用RNA/DAN纯化试剂盒（购自世纪元亨），具体操作方法如下：取已处理样品，加入裂解液600μl,充分颠倒混匀，室温静置3～5 min；将液体吸入吸附柱中，13 000 rpm离心30 s；弃去收集管中的液体，加入600μl洗液，13 000 rpm离心30 s，重复一次；弃去收集管中液体，13 000 rpm空柱2 min，以除去残留液；将吸附柱移入新的1.5 ml离心管中，向中央加入洗脱液25～50μl，室温静置1 min，13 000 rpm离心30 s，离心管中的液体即为病毒核酸模板。

3.3猪伪狂犬病毒荧光PCR鉴定

猪伪狂犬病毒（PRV）荧光PCR鉴定采用猪伪狂犬病毒（PRV）核酸扩增试剂盒（PCR-荧光探针法），购自广州维伯鑫生物科技有限公司，检测方法及判定标准按照试剂说明书进行。对两份病料提取的模板及阳性质控和阴性质控进行荧光PCR扩增后，得到的结果见图1。根据结果可以看出，两份病料均为猪伪狂犬病毒阳性。

图1临床组织样品荧光PCR鉴定PRV结果

3.4猪圆环病毒2型荧光PCR鉴定

猪圆环病毒2型(PCV-2)荧光PCR鉴定采用猪圆环病毒2型(PCV-2)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)，购自广州维伯鑫生物科技有限公司，检测方法及判定标准按照试剂说明书进行。对两份病料提取的模板及阳性质控和阴性质控进行荧光PCR扩增后，得到的结果见图2。根据结果可以看出，2份病料均为猪圆环病毒2型阳性。

4　结果与讨论

根据实验室诊断结果，可以确诊该猪场育肥猪是由猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型混合感染引起的发病和死亡。

该猪场发生的PRV与PCV-2混合感染，在很大程度上与PCV-2感染引起的免疫抑制有关。PCV-2具有免疫抑制特性，因为PCV-2感染猪的淋巴器官中T、B淋巴细胞数量减少，淋巴组织中巨噬细胞浸润，外周血和淋巴组织中的巨噬细胞单核细胞数量升高，导致PCV-2感染猪群免疫功能下降，使猪群对其他病原体的抵抗力大大降低，从而使机体更易感染其他病原，引起混合感染。

从该猪场的两头病死猪中均检出PRV和PCV-2，并且引起免疫抑制的疾病越来越多，可以推断，目前猪场多重感染或者混合感染已经成为发病的规律，也导致猪群发病后的临床症状更加复杂，病情更加严重，确诊更加困难，防治效果差，在以后的疾病预防和诊断过程中应该引起重视。