凃 政， 石 屹， 张广峰， 李万水



一种焚烧骨骼的DN A提取方法

凃 政， 石 屹， 张广峰， 李万水

（公安部物证鉴定中心，北京 100038）

摘要：本文介绍了一种针对烧骨的DNA有效提取方法。对烧骨进行研磨制成骨粉，对骨粉进行大体系脱钙和裂解， 采用Amicon®Ultra-15 离心过滤器对获得的脱钙、裂解上清液进行浓缩，提高DNA的回收率，使用硅胶膜法对浓缩后的DNA溶液进行纯化，并经复合STR扩增检验。使用上述方法成功完成两起严重焚烧骨骼案件的检验，确定了受害人身源。

关键词：法医遗传学；烧骨；DNA提取；纯化；短串联重复序列

骨骼的STR检验是当前鉴定未知名尸骸身份的一种有效手段。但是在实际办案中经常会遇到焚尸的案件，犯罪分子往往会通过焚烧尸体来达到毁尸灭迹的目的，此类案件中死者尸体的软骨等软组织已经完全消失，骨骼开裂碎片化，骨骼内的DNA经过高温燃烧，破坏降解十分严重，DNA含量大大降低，难以进行检验。本文介绍了一种烧骨的DNA提取方法，并已在个案中得到成功的应用。

1 试剂与方法

1.1 试剂、仪器

脱钙液0.5 mol/L EDTA pH 8. 0（Promega，美国），蛋白酶K溶液（20 mg/mL），DTT溶液 （1 mol/ L），骨骼裂解液（Promega，美国），QIAquick®PCR纯化试剂盒（Qiagen，德国），PowerPlex®21扩增试剂盒（Promega，美国），Identifiler®Plus扩增试剂盒（Thermo Fisher，美国）。Amicon®Ultra-15 10K离心过滤器（Millipore，德国），SPEX 6770冷冻研磨机（SPEX SamplePrep，美国）。

1.2 方法

提取方法参考文献［1，2］，并在其基础上进行改进。

样品预处理 挑选焚烧程度相对较轻、厚度较厚的骨骼，用手术刀去除烧骨表面层和污垢，用纯水冲洗干净，在 5% （ W/V） 次氯酸钠溶液中浸泡15 min，纯水洗涤3 次后依次用无水乙醇、乙醚各浸泡10 min，于通风橱中干燥用干净滤纸包裹后砸成骨粉或用研磨机研磨成粉。……