高正琴，李晓波，冯育芳，王 吉，付 瑞，邢 进，王淑菁，魏 杰，王 洪，巩 薇，李冠民，贺争鸣，岳秉飞

（中国食品药品检定研究院，北京 100050）



技术方法

中国实验动物中鼠管状线虫的分子鉴定和感染调查

高正琴，李晓波，冯育芳，王 吉，付 瑞，邢 进，王淑菁，魏 杰，王 洪，巩 薇，李冠民，贺争鸣，岳秉飞

（中国食品药品检定研究院，北京 100050）

【摘要】目的 对鼠管状线虫进行分子鉴定和感染调查，为国家标准的修订提供参考依据。方法 923批5199只SPF动物（包括：1批5只猴，3批25只小型猪，28批55只兔，13批248只地鼠，37批198只豚鼠，93批459只大鼠，742批4179只小鼠，5批25只鸡和1批5只鸭）和145批1389只清洁动物（包括：1批3只兔，4批31只地鼠，16批157只豚鼠，32批268只大鼠和92批930只小鼠）来自全国50个不同的厂家。应用直接镜检实时动态显微视屏摄录技术结合形态学鉴定方法，进行鼠管状线虫感染筛查。应用多重PCR和测序技术，鉴定分离的鼠管状线虫ITS（内转录间隔区）、28S rRNA（28S核糖体RNA）、nad1（NADH脱氢酶亚单位1）和cox1（细胞色素C过氧化物酶亚基1）基因，从分子水平上确证鼠管状线虫感染。结果 应用直接镜检实时动态显微视屏摄录技术，从动物中检出鼠管状线虫的虫卵、幼虫和成虫。根据鼠管状线虫的卵细胞、幼虫、雌雄成虫的大小和形态来鉴定虫种。应用多重PCR测序技术，能从分离的单个鼠管状线虫的虫卵、幼虫和成虫中鉴定出ITS、28S rRNA、nad1和cox1基因，与其他不同种属的寄生虫无交叉反应。应用直接镜检实时动态显微视屏摄录技术，从5199份SPF和1389份清洁动物样本中分别检出鼠管状线虫阳性样本285份和135份。应用多重PCR和测序技术，鉴定证明这些阳性样本中确实含有鼠管状线虫特异性的DNA。……