谢静静，姚晓磊，宋瑞高，吕小康，张瑞鑫，王莉宏，石　磊

(山西农业大学 动物科技学院，山西 太谷 030801)



绵羊精原干细胞的分离纯化与鉴定

谢静静，姚晓磊，宋瑞高，吕小康，张瑞鑫，王莉宏，石磊

(山西农业大学 动物科技学院，山西 太谷 030801)

摘要：旨在探究一种简便高效的绵羊精原干细胞(SSCs)分离纯化方法，为后续研究SSCs奠定基础。本实验采用两步酶消化法对4月龄的绵羊睾丸进行消化处理，获得单细胞悬液。将睾丸细胞接种于0.2%的明胶预处理培养皿中，根据各细胞贴壁能力和速度的不同将SSCs纯化，并在纯化后用SSCs特异标记分子PLZF进行免疫荧光鉴定。结果表明，经免疫荧光染色得出存在PLZF阳性信号。这说明采用两步酶消化和差异贴壁法可以得到纯度较高的SSCs。

关键词：绵羊；精原干细胞；分离；纯化

精原干细胞(Spermatogonial stem cells，SSCs)是指位于曲细精管基膜上，不仅能维持自身数量恒定，又能定向分化产生精母细胞的成体干细胞，是雄性成体内唯一能进行有丝分裂将遗传物质传递到下一代的永生细胞[1]。一般将SSCs分为A、B两型，A型又分为单个A型(A-single，As)、成对A型(A-paired，Apr)和链状A型(A-aligned，Aal)。一般认为As细胞是精子发生过程中的干细胞，可以自我更新成新的干细胞，也可以由细胞间桥连接定向分化形成Apr细胞，进一步分裂形成4链、8链、16链细胞组成的Aal细胞，继续分裂形成A1、A2、A3、A4、In和B型细胞，B型细胞经数次分裂形成精子[2]。SSCs在体外也可诱导分化为精子，是恢复生育能力和保种的一种先进手段[3]。鉴于其在细胞生物学、医学、转基因等领域广阔应用前景，对SSCs生理生化特性、体外培养等实际应用研究，急需建立一种能够有效分离纯化SSCs的方法，得到较高纯度有活力的SSCs。……