汪文伦+++王丹+++牟云++许万云+++胡梦薇++高剑峰

摘要：以建立小球藻（沙漠小球藻）表达系统为目的，为利用小球藻重组表达外源蛋白，以及GFP荧光特性研究沙漠中的小球藻生理及理化性质提供基础方法；同时也探索植物表达载体pCAMBIA2300-35S-OCS能否在沙漠小球藻中表达。通过菌落PCR验证E.coli DH5α是否含有目的基因（GFP基因）的重组植物表达载体pCAMBIA2300-35S-GFP-OCS，然后从E.coli DH5α中提取也构建完成的重组植物表达载体pCAMBIA2300-35S-GFP-OCS；利用电转化的方法将重组植物表达载体pCAMBIA2300-35S-GFP-OCS转入到小球藻细胞中；将电转的小球藻在含有 100 mg/L 卡那霉素的BBM固体培养基中筛选出单克隆，将单克隆在含有15 mg/L卡那霉素的BBM液体培养基中扩大培养，然后利用PCR和RT-PCR预测绿色荧光蛋白基因（GFP基因）的存在与否和表达情况，再利用SDS-PAGE和荧光倒置显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况。通过SDS-PAGE和荧光倒置显微镜观察结果表明绿色荧光蛋白（GFP）在小球藻中表达成功。试验结果表明重组植物表达pCAMBIA2300-35S-OCS能够在小球藻中表达外源蛋白，以及利用GFP的荧光特性研究小球藻的生理生化差异；也为小球藻在沙漠环境上的应用提供基础。

关键词：沙漠小球藻；电转化；植物表达载体；绿色荧光蛋白

中图分类号： S917.1文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2016）06-0041-04

微藻是地球上出现最早的生命之一，是一种能利用光合作用生活和生长的微生物，广泛分布于海洋、陆地、湖泊以及干旱的沙漠之中。它们的形态各异，呈丝状、球形和椭圆形等等，只要是有光和潮湿的地方都能找到这些生命的痕迹[1]。新疆古尔班通古特沙漠是我国第二大沙漠，年降水量70～150 mm，冬季有积雪，其最低温度可达-25 ℃，而最高温度可达35 ℃[2]。……