李京，张祥林，罗明，李亚伟，王翀中， 张小菊

(1新疆农业大学农学院，乌鲁木齐　830052；2新疆出入境检验检疫局，乌鲁木齐　830063)



实时荧光PCR法快速检测地中海实蝇的研究

李京1,2，张祥林2，罗明1，李亚伟2，王翀中2， 张小菊2

(1新疆农业大学农学院，乌鲁木齐830052；2新疆出入境检验检疫局，乌鲁木齐830063)

摘要：【目的】设计用于扩增地中海实蝇的特异性引物，建立快速、灵敏检测地中海实蝇的实时荧光PCR方法。【方法】采用实蝇科昆虫线粒体DNA COI基因的通用引物扩增地中海实蝇以及其它三种供试实蝇的DNA片段，经测序、比对分析，设计出扩增地中海实蝇的特异性引物，用SYBR Green 实时荧光PCR方法验证该引物的特异性与灵敏度。【结果】设计的引物对DZH-F/DZH-R能特异性检测出地中海实蝇，扩增产物的溶解曲线峰值Tm为79.2。该对引物检测地中海实蝇的灵敏度为10-3ng/μL。【结论】所建立的SYBR Green 实时荧光PCR方法检测地中海实蝇特异性强、灵敏度高。

关键词：地中海实蝇；COI基因；实时荧光PCR；快速检测

0引 言

【研究意义】实蝇科(Tephritidae)是双翅目(Diptera)昆虫中的重要类群，全球有40余种实蝇是为害农作物的检疫性害虫，其中果实蝇属(Ceratitis)是最具经济重要性的实蝇类群[1]。许多实蝇种类对多种果实造成巨大危害，如橘小实蝇 (B.dorsalis)能够危害芒果、番石榴、杨桃等250余种水果，果实受虫害后，可造成落果或果实失去经济价值；瓜实蝇(B.cucurbitae)对果蔬的危害范围也达到80余种，并且主要对葫芦科植物危害较严重；枣实蝇(C.vesuviana)虽然寄主较为单一，但其对枣果危害十分严重，该虫2007年在我国新疆地区首次发现，对当地枣产业造成了巨大的经济损失。……