孙乐婷，宋丽颖，李庆玲，李玉梅，王楚盈，张大方

(长春中医药大学，吉林 长春 130117)



参附配伍有效组分对急性心衰大鼠神经-体液分子的调控作用*1

孙乐婷，宋丽颖，李庆玲，李玉梅，王楚盈，张大方

(长春中医药大学，吉林 长春 130117)

摘要:目的：观察人参单煎液中总皂苷、附子单煎液中总生物碱配伍与参附汤中总皂苷和总生物碱对急性心衰大鼠神经-体液因子的调控作用.方法：采用股静脉推注戊巴比妥钠的方法建立急性心衰模型，十二指肠给予单煎液及合煎液提取的有效组分.观察其强心作用，并采用ELISA法测定大鼠血液中肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白介素-18(IL-18)心房肽(ANP)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量变化.结果：各给药组均可降低大鼠血清TNF-a、IL-18和大鼠血浆中ANP、AngⅡ含量，表明附子、人参单煎液提取的有效组分和人参附子配伍合煎液提取的有效组分均有调控部分神经——体液因子的释放作用，尤以人参附子配伍后合煎提取物效果最为明显.结论：参附配伍合煎提取的有效组分其强心作用增强，从而达到了治疗急性心衰的目的，其作用机理可能与调节大鼠血清TNF-a、IL-18和大鼠血浆中ANP、AngⅡ含量有关.

关键词:人参附子单煎；合煎； 配伍急性心衰

中药配伍是中医临床用药的精华之一.而中药配伍则要根据药物的药性和药物之间的相互作用对药效的影响.参附汤为回阳救逆治疗心力衰竭的经典名方，主治四肢厥冷、语声低微、脉搏微弱等.临床已在参附汤基础上将其制成参附注射液用于拯救急症患者.本研究主要考察了人参单煎液中总皂苷、附子单煎液中总生物碱相配伍与参附汤中总皂苷和总生物碱对急性心衰大鼠神经-体液因子的调控作用.本实验室在参附汤前期配伍比例研究中[1]，筛选出人参与附子的治疗心衰的最佳配伍比例为1:2，故本实验亦采用相同配伍比例进行研究.

1实验材料及仪器

1.1实验动物

健康Wistar大鼠，体质量(240g±20 g)，雄性56只，购自长春亿斯生物技术有限公司，合格证号:SCXK(吉)-2011-0004.于室温23℃±2℃，湿度40℃～60℃条件下饲养，自由饮水进食，昼夜规律自然.

1.2实验药物与试剂

人参、附子(黑顺片)原药材购于长春宏检药业；阳性对照药参附注射液(雅安三九药业有限公司生产，批号：Z51020664)；氯化钠注射液(吉林省都邦药业股份有限公司，批号：1205140311)；乌拉坦(国药集团化学试剂有限公司，批号：T2009081)；肝素钠(上海惠世生化试剂有限公司，批号：080308)；TNF-a、IL-18、ANP、AngⅡ试剂盒：北京伊普瑞斯科技有限公司.

1.3实验仪器

MP-150 16道生理记录仪(美国Biopac公司)；MP-2003注射泵 (上海雷恩医疗器械有限公司)；小动物呼吸机(HX-300S，成都泰盟科技有限公司)；台式低温高速离心机(GL-21B，上海飞鸽仪器厂)；Model 680型酶标仪(伯乐生命医学产品(上海)有限公司).

2实验方法

2.1有效组分的提取

人参50g，加10倍量水，浸泡30min，煎煮3次，每次40 min，弃去药渣，合并药液，浓缩至250mL.浓缩液置于分液漏斗中，用水饱和正丁醇萃取3次,合并滤液，蒸干，得浸膏即为人参总皂苷[2].

附子50g，加10倍量水，浸泡30min，煎煮3次，每次40 min，弃去药渣，合并药液，浓缩至250mL.浓缩液置于分液漏斗中，用三氯甲烷萃取3次,合并滤液，蒸干，得浸膏即为附子总生物碱[3].

人参：附子=1:2(25g：50g)，加10倍量水，浸泡30min，煎煮3次，每次40 min，弃去药渣，合并药液，浓缩至250mL.浓缩液置于分液漏斗中,三氯甲烷萃取3次,合并滤液，蒸干,得浸膏即为人参附子合煎液中总生物碱；药液再用水饱和正丁醇萃取3次,合并滤液，蒸干，得浸膏即为人参附子合煎液中总皂苷.

2.2实验动物给药分组及造模方法

取健康Wistar雄性大鼠56只，体重240 g±20g，随机分为7组，即空白对照组(KB组)、模型对照组(MX组)、参附注射液阳性对照组(YX组)、人参总皂苷组(ZG组)、附子总生物碱组(SWJ组)、人参单煎后提取人参总皂苷配伍附子单煎后提取附子总生物碱组(人参：附子=1:2)，(单1:2组)、人参附子配伍合煎提取总皂苷总生物碱组(人参：附子=1:2)，(合1:2组).

参照文献方法改进[4]，20%乌拉坦0.5mL/100g腹腔注射麻醉，将大鼠仰卧位固定在手术台上，用连有16导生理记录仪模块的导管进行左心室插管，当显示器上的波形由血压波变成下沿达0mmHg 时,表明导管已经通过主动脉瓣进入左室腔内.分离气管，连接HX-300S小动物呼吸机，打开胸腔.于四肢皮下埋入针式电极并观察Ⅱ导联心电图及心率(HR)，记录左室内压(LVSP)、左室最大上升速率(dp/dtmax)、左室最大下降速率(dp/dtmin).待各项数值稳定后，从右侧股静脉用微量注射泵恒速注射1.5%戊巴比妥钠，给药速度0.2mL/min，给药时间5min左右，直至+dp/dtmax降至正常水平的20%～40%，稳定后，以0.5%戊巴比妥钠4.5 mL·h-1保证模型稳定，模型稳定5min以上即视为心衰模型成功.造模成功后，空白组十二指肠给予蒸馏水，参附注射液阳性对照组静脉给药6.7mL/kg，各给药组十二指肠给药，人参总皂苷组90.0mg/kg，附子总生物碱组13.8mg/kg，人参单煎后提取人参总皂苷配伍附子单煎后提取附子总生物碱组58.8mg/kg,人参附子配伍合煎提取总皂苷总生物碱组150.9mg/kg.给药后60min，腹主动脉取血，按试剂盒说明方法，测定血清中TNF-a、IL-18的含量，及血浆中ANP、AngⅡ的含量.

2.3统计学方法

3实验结果

3.1对TNF-a、IL-18的含量变化结果

(1)对TNF-a的含量变化结果.TNF-a是一种多功能的炎性细胞因子,是心力衰竭发生发展过程中的重要介导物质之一.TNF-a含量升高抑制心肌收缩力,导致左室功能下降.急性心力衰竭模型成功后，MX组与KB组比较，TNF-a含量明显增高，有显著性差异(p<0.01).给予治疗药物后，各给药组大鼠血清中的TNF-a含量下降，与MX组比较都具有显著性差异(p<0.01)，其中合1:2组的作用效果最为明显，结果见表1.

表1　对TNF-a的影响

注：与KB组比较，##p<0.01；与MX组比较，△△p<0.01，△p<0.05

(2)对IL-18的含量变化结果.IL-18可直接参与心力衰竭发生发展的过程,并直接通过受体影响心肌细胞的功能[5].造模后，MX组与KB组比较，MX组大鼠血清中的IL-18含量明显上升(p<0.01).给药后大鼠血清中IL-18的含量有不同程度的降低，与MX组比较各给药组均具有显著性差异(p<0.01).其中合1:2组对急性心衰大鼠降低大鼠血清中IL-18含量的作用效果最为明显.结果见表2.

表2　对IL-18的影响

注：与KB组比较，##p<0.01；与MX组比较，△△p<0.01，△p<0.05

3.2人参总皂苷、附子总生物碱配伍前后对ANP、AngⅡ的含量变化结果

(1)对ANP含量变化结果.ANP又称心钠素，心房利钠因子，具有改善血流动力学异常及心功能的作用.造模后，MX组与KB组比较，ANP含量明显增高，两组之间有显著性差异(p<0.01).给药后，ANP含量有所下降，与ZG组、SWJ组相比较，单1:2组、合1:2组的作用效果更为明显，且降低幅度也更大，而合1:2组的作用效果最为明显，与MX组比较有显著性差异(p<0.01)，与各给药组之间也有显著性差异.结果见表3.

表3　对ANP的影响

注：与KB组比较，##p<0.01；与MX组比较，△△p<0.01，△p<0.05

(2)对AngⅡ的含量变化结果.AngⅡ可使心血管细胞增生，组织重塑，导致靶器官功能障碍，其重要靶器官为心血管系统[6].在急性心衰的发展过程中，交感神经系统、RAS以及心肌自身自分泌和旁分泌的过度激活使得血浆中AngⅡ含量升高.造模后，MX组与KB组比较，MX组大鼠血浆中的Ang Ⅱ含量明显上升(p<0.01).给药后各给药组大鼠血浆中Ang Ⅱ的含量有不同程度的降低，与MX组比较，均有显著性差异，其中合1:2组对急性心衰大鼠降低大鼠血浆中Ang Ⅱ含量的作用效果最为明显.结果见表4.

表4　对AngⅡ的影响

注：与KB组比较，##p<0.01；与MX组比较，△△p<0.01，△p<0.05

4讨论

人参皂苷是人参的主要成分,生物碱是附子的主要成分，二者也是参附汤中的主要有效组分.当药物在合煎的过程中，成分之间发生促进溶出或拮抗溶出的作用，使成分之间的比例发生变化，甚至在煎煮条件改变时，会产生新的成分或使原有成分消失，因此，考察人参单煎液中总皂苷、附子单煎液中总生物碱与参附汤中总皂苷和总生物碱药效学变化有着重要意义.

心、肝、肺、肾是TNF-a生物合成的主要器官，心肌细胞等多种非免疫细胞在某些应激状态下(如心衰)也可产生TNF-a.据目前研究，心衰时心肌是生物合成TNF-a的主要器官.Levine等[7]报道，终末期心衰及恶液质患者血浆TNF-a水平升高，而且TNF-a水平与心功能分级密切相关.TNF-a含量增高可抑制心肌收缩力、影响心肌重构、促发心肌细胞凋亡等[8].

IL-18可以直接通过受体影响心肌细胞的功能[5]，易导致心肌结构和功能的改变,造成心肌重塑,而心肌重塑是恶化心力衰竭的一个重要影响因素；能使血管收缩,心脏负荷加重,心肌损伤,引起心肌细胞IL-18分泌增多,进而加重心力衰竭，调节心肌功能，减弱收缩力，随心衰严重程度升高[9].

ANP主要由心房分泌，但心衰严重时，心室亦可分泌[10].在心力衰竭时，ANP分泌量增多.ANP与急性心力衰竭的发生发展的严重程度高度相关，是心肌肥厚的相关因子，是反应心肌肥厚的重要指标之一.心衰后心脏肥大，心房负荷过重，心肌纤维形态发生改变，导致ANP分泌增加.临床观察证明，随着心衰的进行，ANP的分泌量升高，外周血中ANP含量与心衰严重程度呈正相关，心衰越严重则ANP含量越高[11]，所以可将ANP是判断心衰等级的一个重要的评价指标.

肾素-血管紧张素系统(RAS)是心血管功能方面的中心调节剂，而AngⅡ是肾素-血管紧张素-醛固酮系统中的一种重要活性成分.AngⅡ具有较强的血管收缩作用，是心室重构的重要因素，对心肌产生正性肌力作用，能使全身小动脉收缩进而升高血压，还能促进肾上腺皮质分泌醛固酮[12].在急性心衰的发展过程中，AngⅡ含量升高，可加速心肌重建，损伤心脏[13].因此，血液中AngⅡ的含量的高低，可作为评价心衰程度的一个重要指标.

所以，本实验主要是探讨人参单煎液中提取有效组分配伍附子煎煮液中提取有效组分和人参、附子配伍后提取有效组分对大鼠急性心力衰竭模型血液生化指标的影响，研究结果表明，人参单煎液中有效组分、附子单煎液中有效组分与人参、附子单煎液有效成分提取物配伍同人参附子配伍后合煎液有效组分提取物，对戊巴比妥钠致急性心衰大鼠均可改善急性心衰的功能，增强心肌收缩力.在改善血流动力学指标和TNF-a、IL-18、ANP、AngⅡ等的血液生化指标，但以合1:2组即人参附子配伍后合煎液有效组分提取物组最佳，提示人参附子配伍后合煎可影响有效成分的溶出，也可能对有效成分结构发生改变或产生其他抗心衰物质进而增加其有效组分抗心衰作用，这还有待我们进行深入研究.

参考文献：

[1]李玉梅,张超.附子与人参不同比例配伍对急性心衰大鼠神经-体液因子的影响[J].长春中医药大学学报,2013,29(6):963-964.

[2]姚静,张春椿,俞冰.HPLC 同时测定参附汤中人参皂苷 Rg1、Re、Rb1含量的研究[J].中华中医药学刊,2012,30(4):788-790.

[3]姚静,张春椿,熊耀康.HPLC同时测定参附汤中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱含量的研究[J].浙江中医药大学学报,2012,36(5):554-557.

[4]李仪奎,金若敏,王钦茂.中药药理实验方法学[M].二版.上海：上海科学技术出版社2006，10，419.

[5]Mallat Z,Heymes C,Corbaz A,et al.Evidence for altered interleukin( IL)218 pathway in human heart failure[J].FASEB J,2004,18:752.

[6]MK Baig, WJ Mckenna, et al.Thepathophysiology of advanced heart failure[J].American Heart Journal,1998,135[6]:S216-S230.

[7]Levin B,Kalman J,Mayer L,et al.Elebated circulating levels of tumor necrosis factor in congestive heart failure[J].N Engl J Med,1990,323(4):236-241.

[8]林鑫.复心汤对心衰大鼠模型TNF-a及心肌细胞凋亡的影响[D].济南：山东中医药大学,2012,4.

[9]徐菲飞.参附注射液抗心力衰竭的机制研究[D].成都：成都中医药大学,2013,5.

[10]张建,华琦.心力衰竭的诊断与治疗[M].北京：人民卫生出版社,2006,第1版:7.

[11]蒲艳.血装利钠肽水平与慢性心力衰竭的探讨[J].贵州医药,2004,28(10):879-881.

[12]肖骏,余强.血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂在充血性心力衰竭中的作用机制和应用进展[J]. 医学综述,2005,11(4):312-313.

[13]庄志雄.毒理学基础[M].北京:人民卫生出版社,第5版,395.

(责任编辑:王海波)

Regulation Effects about Nerve-Humoral Factors of Shenfu Effective Components in Rat after Acute Heart Failure

SUN Yue-ting, SONG Li-ying, LI Qing-ling, LI Yu-mei, WANG Chu-ying, ZHANG Da-fang

(ChangchunUniversityofChineseMedicine,Changchun,Jilin130117,China)

Abstract:Purpose: Observing the regulation effects about Nerve-humoral factors of Shenfu effective components in rat after acute heart failure. Methods: From the single decoction solution of ginseng, single decoction solution of aconite, synthetic decoctions solution of ginseng and aconite, extracting total saponins and total alkaloids. Using the ELISA method to determine the content changes of TNF-a, IL-18, ANP, AngⅡin the rats’ blood. Observing the regulation effects of aconite single decoction, ginseng single decoction and ginseng compatibility aconite decoction on Nerve-humoral factors. Results: Each treatment group has lower TNF-a, IL-18 contents in rats’ serum and ANP, AngⅡ contents in rats’ plasma. That single decoction ginseng, aconite single decoction, ginseng and aconite synthetic decoctions have a regulation role on the Nerve-humoral factors, especially ginseng and aconite synthetic decoctions. Conclusions: The compatibility of ginseng and aconite decoction can enhance the cardiac function, thereby achieve the purpose of treating acute heart failure, its mechanism may be related to enhancing myocardial contractility, improving hemodynamics and adjusting the contents of serum TNF-a, IL-18 and the contents of ANP, AngⅡin rats’ plasma.

Key words:Single decoction solution of ginseng-aconite; combined decoction; compatibility of acute heart failure

DOI:10.13877/j.cnki.cn22-1284.2016.04.005

*收稿日期：2015-10-22

基金项目：国家自然科学基金“基于‘量—效—毒’关系的参附汤治疗心力衰竭的药效物质基础与作用机制研究”(81173597)

作者简介：孙乐婷，女，研究生.

通讯作者：张大方，博士，教授，博士研究生导师.

中图分类号：R285.5

文献标志码：A

文章编号：1008-7974(2016)02-0015-04