郑铁鑫 张影 柴华 尹尧 付丽杰/哈药集团生物疫苗有限公司



猪血清对猪肺炎支原体培养影响的研究

郑铁鑫 张影 柴华 尹尧 付丽杰/哈药集团生物疫苗有限公司

一、材料

（一）菌株

1.猪肺炎支原体P-5722-3株，由美国硕腾动物保健公司提供，哈药集团生物疫苗有限公司保藏。

2.猪肺炎支原体P-5722-3株CCU阳性标准品（CCU检测），由美国硕腾动物保健公司提供，哈药集团生物疫苗有限公司保藏。

（二）完全培养基

1.培养基组分A：根据猪肺炎支原体P-5722-3株培养基配方要求，制备组分A。

2.培养基组分B：猪血清

3.猪肺炎支原体P-5722-3株完全培养基由培养基组分A与培养基组分B共同制备，培养基组分A由哈药集团生物疫苗有限公司采用无菌过滤方式制备，培养基组分B采用热灭活方式制备。

（三）无菌检验培养基

酪胨琼脂斜面（G.A）、硫乙醇酸盐酪胨汤（T.G）葡萄糖蛋白胨（G.P），均由本公司培养基班组提供。

（四）设备

恒温振荡器：上海世平实验设备有限公司SPH-211C

PH计： METTER TOLEDO FE 20C

二、方法

（一）试验方法

针对培养组分B，分别选择5种猪血清，进口猪血清1#（美国产）、进口猪血清2#（新西兰产）、国产猪血清3#、国产猪血清4#、国产猪血清5#，各2个批次，按培养基总量10%与培养基组分A制备成猪肺炎支原体完全培养基，进行平行培养试验，猪血清在使用前均采用56℃，30 min热灭活处理。

（二）培养方法

取猪肺炎支原体P-5722-3株菌株按10%接种完全培养基中，37℃振荡培养，每隔8 h检测一次PH值，当PH值接近6.8时，将检测时间缩短，直至PH值到达6.8左右时，取少量样品进行检测并传代培养，连续传代培养三代并分别进行无菌检验。……