吴 丹，冯 健，莫显刚，刘应才

（1.西南医科大学附属医院心血管内科，四川泸州 646000；2.贵阳医学院附属医院老年病科，贵州贵阳 550004）



技术方法

改良的乳小鼠心肌细胞原代培养方法

吴 丹1，冯 健1，莫显刚2，刘应才1

（1.西南医科大学附属医院心血管内科，四川泸州 646000；2.贵阳医学院附属医院老年病科，贵州贵阳 550004）

【摘要】目的 建立一种稳定而快速的乳小鼠心肌细胞的原代培养方法。方法 用多聚赖氨酸预包被处理培养皿，采用两步法（0.25%胰酶4℃过夜，0.5 mg/mL-1.0 mg/mL II型胶原酶 +5 mg/mL白蛋白的胶原消化液37℃短时多次消化），通过差速贴壁70 min+5-溴脱氧尿嘧啶的使用来纯化心肌细胞。倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态变化，台盼蓝染色法检测细胞存活率，α-actinin特异性免疫荧光染色鉴定心肌细胞并计算纯度。结果心肌细胞形态良好，自发搏动，细胞成活率可达到98%，纯度可达到95%。结论 本方法培养的心肌细胞存活率高，纯度高，是一种理想的心肌细胞原代培养方法。

【关键词】乳小鼠；心肌细胞；原代培养

目前，对于心血管疾病机制的研究，在器官与组织水平上，通过基因敲除和转基因小鼠建立的心血管动物模型作出了极大的贡献；在细胞分子水平上，原代培养心肌细胞作为一种体外实验研究模型无可替代，它既能够排除神经、体液、内分泌等因素的干扰而单独地观察研究心脏的发育以及心血管疾病的发生、发展机制［1］，同时具有自发搏动性，保持了其在体内的许多结构和功能。关于啮齿类动物心肌细胞培养要追溯到20世纪60年代，Harary and Farley［2］首次从成年大鼠分离培养出心肌细胞。……