石 亮，张 晨，向志光，邓仪晨，苏静芬，刘云波

（1.中国医学科学院医学实验动物研究所，北京 100021；2.北京大学生命科学学院，北京 100871）



腺相关病毒介导的狨猴P53基因沉默

石 亮1，张 晨2，向志光1，邓仪晨1，苏静芬1，刘云波1

（1.中国医学科学院医学实验动物研究所，北京 100021；2.北京大学生命科学学院，北京 100871）

【摘要】目的 在细胞和整体动物水平，利用RNA干扰技术下调绒猴p53基因表达。方法 对狨猴p53基因做生物信息学分析，针对靶序列设计shRNA干扰序列，构建在腺相关病毒载体上，转染非洲绿猴肾细胞（cos-7），在细胞水平用荧光定量PCR检测p53mRNA抑制效果，以Western blot方法检测p53蛋白水平表达变化；优选shRNA干扰序列，包装含shRNA干扰序列的8型腺相关病毒，静脉注射感染狨猴；手术取少量肝脏组织，用Western blot和免疫组化方法检测p53蛋白水平的变化。结果 细胞水平研究发现2个有效RNA干扰靶点，mRNA干扰效率分别为（82.7±8.1）%和（80.7±7.5）%（P＜0.05）；蛋白表达下调（77.3±11.5）%和（73.7±10.7）%（P＜0.05）；2只绒猴感染病毒后，经活体荧光成像分析可见病毒在肝脏、睾丸、颈部等位置分布，狨猴肝脏P53蛋白经Western blot、免疫组化分析未见明显变化。结论 本研究在细胞水平实现绒猴P53基因表达下调，但整体动物水平狨猴肝脏P53蛋白表达未发现明显变化；今后需在感染方式等方面做进一步优化。

【关键词】AAV8；P53；RNA干扰；狨猴

RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，广泛应用于基因功能研究与基因治疗领域。利用RNAi的方法已经成功在啮齿类动物的受精卵中下调基因的表达，建立相关的动物模型［1］，但是在狨猴上还没有相应研究。腺……