邓　超，任改艳，孙阿宁，罗晓平，王峥涛，窦　薇

(上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室暨上海市复方中药重点实验室，上海　201203)



豆蔻明对TLR4/MyD88/NF-κB/iNOS信号通路的调节作用

邓超，任改艳，孙阿宁，罗晓平，王峥涛，窦薇

(上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室暨上海市复方中药重点实验室，上海201203)

摘要：目的探讨豆蔻明(cardamonin，CDN)对RAW264.7小鼠巨噬细胞Toll样受体4(toll-like receptor 4, TLR4)/MyD88/NF-κB/iNOS信号通路的调节作用。方法利用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)处理RAW264.7细胞建立炎性细胞模型并分组：正常对照组(Vehicle组)、模型组(LPS组)和药物处理组(LPS+CDN组)；CCK-8方法检测细胞活力，Griess法检测细胞培养上清一氧化氮(nitric oxide，NO)含量，RT-PCR检测诱导型NO合成酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1, MCP-1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)-ɑ、白介素(interleukin，IL)-1β和IL-6的mRNA表达，Western blot检测iNOS、TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88，MyD88)、核因子-κB(nuclear factor κB, NF-κB)phosphorylated(p)-p65、inhibitor κBα(IκBα)和p-IκBα的蛋白表达。结果1～50 μmol·L-1豆蔻明对RAW264.7细胞没有毒性，但可以剂量依赖性抑制LPS诱导的NO分泌和iNOS、COX-2、MCP-1、TNF-α、IL-1β及IL-6的mRNA表达，25 μmol·L-1豆蔻明可下调LPS诱导的iNOS、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达及抑制IκBα降解。结论豆蔻明通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB/iNOS信号通路从而抑制NO的产生。

关键词：RAW264.7细胞；TLR4；MyD88；NF-κB；iNOS；豆蔻明

Toll样受体4(toll-1ike receptor 4，TLR4)是介导天然免疫的一类重要的跨膜蛋白受体，与宿主细胞对各种微生物致病原的识别有关[1]。TLR4能特异性地识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns，PAMPs)，通过跨膜信号转导将病原相关分子刺激信号转导入细胞内，通过髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88，MyD88)触发信号级联，使核因子-κB(nuclear factor kappa-B，NF-κB)抑制单位IκBα(inhibitor of κBα)发生磷酸化并降解，NF-κB与IκBα解离进入细胞核，与下游基因的启动子或增强子中的κB转录调控序列发生特异性结合，导致炎症相关基因的转录表达，最终引起炎症因子大量释放和炎症反应[2]。……