张静 丁博 张华 祁俊生 沈昱翔 周浓 陈秀红 杨冬梅

摘要：目的 研究9种不同干燥方法对滇重楼根茎中总皂苷含量的影响及抗氧化性的差异。方法 采用紫外-可见分光光度法测定滇重楼药材中总皂苷的含量，通过1，1-二苯基-2-苦基肼（DPPH）法、2，2'-连氮基-双-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS+）自由基清除法评价其皂苷提取物的抗氧化能力。结果 不同干燥方法滇重楼根茎中总皂苷含量存在显著差异，35 ℃烘干样品的总皂苷含量最高，为17.557 mg/g，其次为自然阴干样品13.740 mg/g。综合2种抗氧化能力检测结果，不同干燥方法滇重楼皂苷提取物均有很好的抗氧化能力，其中35 ℃烘干样品抗氧化能力最强，均表现一定的浓度依赖效应。结论 35 ℃烘干干燥处理是获得高品质和高活性滇重楼药材的较好方法。

关键词：滇重楼；干燥方法；烘干法；总皂苷；抗氧化活性

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.07.024

中图分类号：R283.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）07-0095-03

Effects of Different Drying Methods on Total Saponin Content and Antioxidant Capacity of Paris polyphylla var. yunnanensis ZHANG Jing1， DING Bo1， ZHANG Hua1， QI Jun-sheng1， SHEN Yu-xiang2， ZHOU Nong1， CHEN Xiu-hong1， YANG Dong-mei1 （1. College of Life Science& Engineering， Chongqing Three Gorges University， Chongqing 404000， China； 2. College of Agriculture， Anshun University， Anshun 561000， China）

Abstract： Objective To study the effects of 9 different drying methods on total saponin content and antioxidant capacity of Paris polyphylla var. yunnanensis. Methods UV-VIS spectrophotometry was used for measuring the total saponin content of P. polyphylla var. yunnanensis， 2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl （DPPH） and 2，2'-azino-bis （3-ethylbenzthiozoline-6）-sulphonic acid （ABTS+） radical scavenging methods were used for evaluating the antioxidant capacity of P. polyphylla var. yunnanensis extracts. Results The total saponin contents of P. polyphylla var. yunnanensis dried by different methods existed significant difference. The sample dried at 35 ℃ showed highest total saponin content （17.557 mg/g）. The sample dried in the shade naturally showed middle total saponin content （13.740 mg/g）. Based on the results of antioxidant capacity detected by two methods， the samples of P. polyphylla var. yunnanensis dried by 9 different methods all showed good antioxidant capacity and showed a certain concentration dependence. Conclusion The samples dried at 35 ℃ have the highest antioxidant capacity. Therefore， drying at 35 ℃ is a better drying method to obtain high quality and high activity of P. polyphylla var. yunnanensis.

Key words： Paris polyphylla var. yunnanensis； drying method； oven drying method； total saponin content； antioxidant capacity

植物皂苷具有良好的抗氧化活性，能有效清除体内自由基、抑制细胞膜的脂质过氧化以及保护机体生物大分子等[1-2]。滇重楼为百合科植物云南重楼Paris polyphylla Smith var. yunnanensis（Franch.）Hara的干燥根茎，被2010年版《中华人民共和国药典》（一部）

基金项目：国家自然科学基金（81260622）；贵州省科技厅科学技术基金[黔科合J字LKA（0122）07]；万州区科技计划项目（201301024）；重庆市教委科学技术研究项目（KJ131109）

通讯作者：周浓，E-mail：erhaizn@126.com

收载为中药重楼的原植物之一[3]。滇重楼主要活性成分是甾体皂苷类化合物，发挥着重要的药理作用[4-5]。

产地加工是中药材生产与品质形成的重要环节之一，其目的是提供安全性与有效性于一体的高品质原药材。传统重楼的加工为每年秋季采挖，除掉须根，洗净，晒干[3]。该方法存在干燥时间较长、受环境及天气的影响较大等弊端，可能导致药材活性成分损失、药性改变等问题[6]。目前滇重楼药材品质参差不齐，部分药材活性成分含量达不到药典标准，严重影响药材的供应及以其为原料的中成药质量[7]。而有关滇重楼干燥加工方法的研究尚未见报道。鉴于此，本研究通过比较不同干燥方法对滇重楼根茎中皂苷物质含量和抗氧化活性的影响，以期找到一种较有利于减少活性物质损失的干燥方式，为滇重楼药材的产地初加工提供依据。

1 仪器与试药

UV-2450型紫外可见分光光度计（日本岛津公司），DHG-9123A型鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司），EG720FA5型微波炉（额定输出功率1300 W，额定微波功率50 Hz，美的集团），WS70-1型红外线快速干燥器（功率500 W，上海锦屏仪器仪表有限公司），SB-5200DTN型超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份有限公司），RV 10 basic V型旋转蒸发仪（德国IKA集团），CP225D型分析天平（德国Sartorius公司）。

薯蓣皂苷元对照品（批号110833-201205，中国食品药品检定研究院，供含量测定用）。滇重楼新鲜根茎为采集于重庆市开县满月乡种植基地苗圃的同一批样品，重庆三峡学院生命科学与工程学院周浓副教授鉴定为百合科植物云南重楼Paris polyphylla var. yunnanensis的根茎。所用试剂均为分析纯。甲醇（批号20141101），重庆川东化工（集团）有限公司；高氯酸（批号2013057），天津市鑫源化工有限公司；1，1-二苯基-2-苦基肼（DPPH，批号2175918），Sigma公司；无水乙醇（批号2013090201），成都市科龙化工试剂厂；2，2'-连氮基-双-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS+，批号20110913），Amresco公司；过硫酸钾（批号20121227），天津市永大化学试剂有限公司。水为双蒸水。

2 方法与结果

2.1 干燥方法

选择大小均一的滇重楼新鲜根茎180株，随机分为9组，每组20株，分别采用以下干燥方法干燥至恒重。①自然晒干法（药典方法）：将洗净的滇重楼直接在太阳下晾晒（处理代码S1，下同）；②自然阴干法：将洗净的滇重楼置室内通风干燥处阴干（S2）；③烘干法：热风干燥温度为35 ℃（S3）、70 ℃（S4）、105 ℃（S5）；④微波干燥法：干燥功率为390 W（S6）、650 W（S7）、910 W（S8）；⑤红外干燥法：将洗净的滇重楼置红外线快速干燥器内进行干燥（S9）。

2.2 总皂苷含量测定

参照文献[8-9]方法略作修改。标准曲线的制备：精密称取薯蓣皂苷元对照品适量，用甲醇溶解并定容至25 mL，制备浓度为0.22 mg/mL的溶液。精密量取上述对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.5、0.6、0.8 mL于10 mL具塞刻度试管中，挥干溶剂，精密加入高氯酸5.0 mL，置65 ℃水浴中显色25 min，取出，冷却至室温，以相应的试剂为空白，在408 nm处测定吸光度，以对照品浓度（μg/mL）对吸光度建立标准曲线，得回归方程Y=31.584 X-0.0502（r=0.999 1）。

提取液制备参照文献[8-9]方法略作修改。精密称取待测品粉末0.2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声处理（功率300 W，频率40 kHz）40 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀后过滤，取续滤液，即得。精密吸取提取液1.0 mL，按上述方法测定吸光度，计算滇重楼根茎中的薯蓣皂苷元含量。结果见表1。

从表1可以看出，35 ℃烘干法（S3）的样品中总皂苷含量最高，达17.557 mg/g；阴干方法（S2）次之，为13.740 mg/g；910 W条件下微波干燥法（S8）含量最低。同时，35 ℃烘干法与传统干燥方法（晒干）相比，能显著降低干燥时间，与周氏等[10]研究结论一致。微波干燥法、烘干法中，总皂苷含量随着加热功率（温度）的增加有降低的趋势，可能在高温（高功率）条件下内源酶受到破坏，使药材自身的呼吸减弱，促进了提取过程中水解薯蓣皂苷的能力[11]。

2.3 体外抗氧化性评价

2.3.1 清除DPPH自由基能力 参照孙氏等[12]方法略作修改。精密量取25.61 mg/L DPPH溶液3.5 mL，加入70%乙醇溶液0.5 mL，混匀，在波长517 nm处测吸光度Ac。分别取0.5 mL提取液，加入25.61 mg/L DPPH溶液3.5 mL，混合均匀，室温避光反应30 min后于波长517 nm处测定吸光度Ai。同时测定70%乙醇溶液3.5 mL中加入0.5 mL不同浓度各提取液的吸光度Aj。DPPH自由基清除率（SH）=[1-（Ai-Aj）÷Ac]×100%。结果见表2、图1。可以看出，滇重楼总皂苷对DPPH自由基具有较强的清除能力，且随总皂苷浓度增加而增强，与高氏等[2]研究结果一致，呈现一定的线性关系，样品S3（35 ℃烘干法）IC50最小，即DPPH抗氧化性最强。

2.3.2 清除ABTS+自由基能力 参照杨氏等[13]方法略作修改。取7 mmol/L ABTS+溶液5.0 mL，加入140 mmol/L过硫酸钾溶液88.0 μL，室温下置于暗处反应12～16 h，形成ABTS+自由基的贮备液。在734 nm处，用70%乙醇溶液稀释ABTS+自由基贮备液，备用。准确量取0.5 mL滇重楼总皂苷原液（参照文献[9]方法略作改进），加入3.5 mL ABTS+溶液，摇匀，在室温条件下反应6 min，于734 nm处测定吸光度AE。同时吸取3.5 mL ABTS+溶液，加入体积分数70%乙醇溶液0.5 mL于734 nm处测定吸光度AB。ABTS+自由基清除率（SC）=（AB-AE）÷AB×100%。结果见表2、图2。可见，滇重楼总皂苷对ABTS+自由基具有较强的清除能力，且随总皂苷浓度的增加而增强，与高氏等[2]研究结果一致。样品S3（35 ℃烘干法）IC50最小，即ABTS+抗氧化性最强。

3 讨论

本试验结果表明，不同干燥方法对滇重楼中总皂苷含量存在显著影响，35 ℃烘干样品中的总皂苷含量最高，达到17.557 mg/g。不同干燥方法滇重楼根茎中总皂苷提取物对DPPH、ABTS+均有一定的清除作用，均具有较好的体外抗氧化能力，且抗氧化能力与总皂苷含量存在一定的量效关系，35 ℃烘干样品的抗氧化能力最强。

总之，35 ℃烘干处理在一定程度上减少了滇重楼皂苷类成分的损失，能更好地发挥其DPPH和ABTS+抗氧化能力，且具有干燥时间短的优点。因此，35 ℃烘干法可以作为滇重楼产地加工的适宜干燥方法。

参考文献：

[1] 王晶，刘春明，白鹤龙，等.中药中皂苷类化合物的抗氧化活性评价研究[J].时珍国医国药，2010，21（6）：1485-1487.

[2] 高云涛，杨利荣，杨益林，等.重楼提取物体外清除活性氧及抗氧化作用研究[J].中成药，2007，29（2）：195-198.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：243-244.

[4] 武珊珊，高文远，段宏泉，等.重楼化学成分和药理作用研究进展[J].中草药，2004，35（3）：344-347.

[5] 赵保胜，朱寅荻，马勇，等.中药重楼研究进展[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（11）：267-270.

[6] 曾珍，王晶，贾凌云，等.不同干燥和炮制方法对北柴胡皂苷类化合物的影响[J].沈阳药科大学学报，2012，29（8）：650-656.

[7] 李海涛，罗先文，管燕红，等.云南省不同地区滇重楼皂苷含量的对比及影响因子分析[J].中国中药杂志，2014，39（5）：803-806.

[8] 杨骁，张振秋.重楼中总皂苷的含量测定[J].中华中医药学刊，2007， 25（11）：2420-2422.

[9] 喻祖文，刘颖新，李辉，等.微波法提取重楼总皂苷的工艺研究[J].时珍国医国药，2013，24（4）：833-834.

[10] 周浓，张华琦，丁博，等.不同干燥方法对滇重楼中薯蓣皂苷元含量的影响[J].时珍国医国药，2015，26（2）：361-362.

[11] 周艳林，钟小清，孔祥春，等.不同干燥方式对菝葜中薯蓣皂苷元含量的影响[J].时珍国医国药，2008，19（12）：3023-3024.

[12] 孙婷，姚佳，肖娅萍.七叶鬼灯檠总酚微波辅助提取工艺优化及其DPPH自由基清除能力分析[J].中成药，2014，36（2）：409-412.

[13] 杨念，芮汉明.金针菇提取物的提取工艺优化及其抗氧化性能研究[J].食品与发酵工业，2011，37（1）：194-198.

（收稿日期：2015-07-25）

（修回日期：2015-09-12；编辑：陈静）