孟书燕，郭 杰，高庚渠，刘改霞，马 威

(河南质量工程职业学院，河南平顶山 467000)

小鼠Klf4基因的原核表达研究

孟书燕，郭 杰，高庚渠，刘改霞，马 威*

(河南质量工程职业学院，河南平顶山 467000)

摘要[目的]对小鼠Klf4基因重组蛋白进行原核表达分析。[方法]利用双酶切从重组质粒pMXs-Klf4上回收小鼠Klf4基因片段，克隆入pET-41a(+)载体后转化BL21大肠杆菌，用IPTG诱导表达，探讨诱导表达最佳浓度和时间，最后采用SDS-PAGE对重组蛋白进行鉴定及分析。[结果]重组质粒Klf4-pET-41a(+)在IPTG诱导下可表达与预期相符的约为51 ku的KLF4蛋白；经IPTG刺激后重组蛋白表达增多，以0.8 mmol/L IPTG诱导6 h为佳；重组蛋白以包涵体形式存在于大肠杆菌BL21中。[结论]小鼠Klf4基因可在原核细胞中表达。

关键词小鼠；Klf4基因；原核表达；大肠杆菌

Krüppel样因子4(Krüppel-likefactor4，Klf4)为1996年发现的锌指转录因子家族成员之一，其在细胞增殖、分化、胚胎发育等生命过程中发挥重要作用[1]。研究表明，采用体外导入Klf4、Oct4/POU5F1、Sox2和c-Myc 4个转录因子可将小鼠体细胞直接重构为胚胎干细胞(ES，embryonicstemcells)样的诱导性多能干细胞[2]，因此Klf4作为分化体细胞重编程的重要诱导因子之一，一直是该领域的研究热点[3]。但目前关于Klf4基因原核表达的研究较少。笔者以小鼠Klf4基因为目的基因，构建原核表达载体，对其原核表达进行分析，为今后Klf4融合蛋白多克隆抗体制备及其基因表达调控机理的功能研究奠定基础。

1材料与方法

1.1主要试剂、载体及菌株大肠杆菌工程菌DH5α、BL21(DE3)、pMXs重组质粒和原核表达载体pET-41a(+)均为西北农林科技大学干细胞研究中心保存；DNA纯化回收试剂盒(Tiangen)，蛋白Marker、SalⅠ、NcoⅠ、PstⅠ和HindⅢ、T4DNA连接酶、DNAMarker、Amp、Kan(TaKaRa)，其他试剂均为国产分析纯。……