李伟伟，朱紫祥，曹伟军，杨 帆，李 丹，张克山，刘湘涛，郑海学

(中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，国家口蹄疫参考实验室，甘肃兰州 730046)

猪ESD真核表达质粒的构建及其抑制口蹄疫病毒复制的研究

李伟伟，朱紫祥，曹伟军，杨 帆，李 丹，张克山，刘湘涛，郑海学*

(中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，国家口蹄疫参考实验室，甘肃兰州 730046)

摘要[目的]探究猪ESD蛋白的抗病毒功能，通过构建猪ESD真核表达质粒，研究其是否能够抑制口蹄疫病毒在PK-15细胞中的复制。[方法]从PK-15细胞中提取总RNA，反转录为cDNA，PCR扩增出猪的ESD基因，构建到pcDNATM3.1/Myc-His A真核表达载体上。通过Western blotting和实时定量PCR检测ESD蛋白的表达情况及其抗病毒功能。[结果]获得了猪ESD真核表达载体，转染后能够正常表达。FMDV感染PK-15细胞后，ESD转录水平显著上调；过表达ESD蛋白显著抑制FMDV的复制；下调表达ESD蛋白显著促进FMDV的复制。[结论]猪ESD蛋白能够抑制FMDV在PK-15细胞中的复制。

关键词口蹄疫病毒；酯酶D；抗病毒功能

口蹄疫(Foot and Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus，FMDV)引起的偶蹄动物感染并发病的一种急性、烈性传染病，易感动物为牛、猪、羊、骆驼和鹿等偶蹄类动物[1]。FMDV属于小RNA病毒科(Picornaviridae)口蹄疫病毒属(Aphthovirus)，为单股正链无囊膜的RNA病毒[2-3]。截至目前，已发现7个血清型，分别为A、O、C、AsiaI、SAT1、SAT2、SAT3，且每个血清型又可分为多个亚型，各血清型之间无交叉保护现象，同型内的亚型之间仅有部分交叉保护[4]。口蹄疫病毒颗粒由外壳蛋白和RNA组成，外壳蛋白由4种结构蛋白各60个分子构成(VP1、VP2、VP3和VP4)；……