朱丽萍，杨文浩，任婷婷，丛　霞，李华涛，曹荣峰，刘楚君，田文儒（青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109）



脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞中炎性因子和核转录子-κB的表达

朱丽萍，杨文浩，任婷婷，丛霞，李华涛，曹荣峰，刘楚君，田文儒
（青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109）

摘要：试验预探索脂多糖（LPS）刺激奶牛乳腺上皮细胞炎性因子产生时间、浓度以及其对NF-κB信号通路的激活情况。用酶消化法培养奶牛乳腺上皮细胞（bMEC）；CCK-8法筛选LPS最佳刺激浓度（IR≤10%），并用其处理对数期生长的bMEC。ELISA试剂盒检测0～24 h不同处理时间细胞培养液上清中TNF-α和IL-1β表达变化，以确定炎症模型是否建立成功；用Western-Blot检测核转录因子NF-κB（p-p65和p65）及其抑制蛋白（p-IκBα和IκBα）的表达。结果显示，用酶消化法成功培养原代bMEC；CCK-8法筛选LPS的最佳致炎浓度为1 μg/mL；LPS处理后3～24 h可极显著增加奶牛乳腺上皮细胞中TNF-α和IL-1β表达，并在处理后15 min极显著提高bMEC中p-p65和p-IκBα的表达。上述结果说明，LPS能够在3～24 h内有效诱导bMEC炎症模型的建立，并能在15 min时活化奶牛乳腺上皮细胞中的NF-κB信号通路。

关键词：奶牛乳腺上皮细胞；脂多糖；TNF-α；IL-1β；NF-κB

奶牛乳腺炎是对奶牛养殖业危害最严重的疾病之一，不仅使奶牛产奶量下降，还影响乳品质量、危害食品卫生安全。大肠杆菌等革兰阴性菌是乳腺炎常见的致病菌，脂多糖（LPS）是革兰阴性菌细胞壁的特殊成分，能够使宿主机体组织器官受到损伤[1]。NF-κB能够调节与炎症、免疫密切相关的细胞介质，如细胞因子、趋化因子、细胞生长因子等[2]。因此，抑制NF-κB的活性被认为是控制炎症、免疫反应的有效方法[3]。……