黄甜，曹忠洋，杨耀辉，曹更生1 河南大学 生命科学学院，河南 开封 4750042 河南大学 生物工程研究所，河南 开封 475004



绒山羊细菌人工染色体重组及细胞转染系统

黄甜1,2，曹忠洋1,2，杨耀辉1,2，曹更生1,2
1 河南大学 生命科学学院，河南 开封 475004
2 河南大学 生物工程研究所，河南 开封 475004

黄甜, 曹忠洋, 杨耀辉, 等. 绒山羊细菌人工染色体重组及细胞转染系统. 生物工程学报, 2016, 32(3): 317–328.

Huang T, Cao ZY, Yang YH, et al. Cashmere goat bacterial artificial chromosome recombination and cell transfection system. Chin J Biotech, 2016, 32(3): 317–328.

摘 要:绒山羊 (Cashmere goat) 是一类以生产山羊绒为主的山羊品种，因其绒毛纤细有光泽、轻盈、保暖而备受青睐。绒山羊角蛋白关联蛋白 (Keratin associated protein，KAP) 和骨形态发生蛋白 (Bone morphogenetic protein，BMP) 在羊绒纤维毛囊细胞的增殖和分化过程中起重要作用。为了提高山羊绒的产量和品质，对包含kap6.3，kap8.1和bmp4基因的细菌人工染色体 (Bacterial artificial chromosome，BAC) 进行研究。首先采用同源重组的方法对BAC进行修饰，其次将哺乳动物密码子优化过的Tol2转座子加入BAC中，最后采用Amaxa Nucleofector核转染技术将修饰过的BAC转入绒山羊成纤维细胞。结果表明成功构建了含有目的基因的BAC-Tol2载体。载体上包含UBC启动元件的egfp标记基因和真核筛选抗性neo基因，并且载体的两端加有loxp元件，为转染细胞后标记和抗性基因的去除作准备。载体转染细胞效率达到1%−6%，最高可达10%。成功获得了外源整合kap6.3、kap8.1和bmp4基因的细胞株，为以后克隆绒山羊作准备。研究表明，在BAC的修饰中应用Tol2转座子系统增加了电转染后的整合率，提高了BAC无错重组的效率和精确性。

关键词:绒山羊，细菌人工染色体 (BAC)，Tol2转座子，电转染

Received: June 24, 2015; Accepted: August 31, 2015

Supported by: Transgenic Major Projects (No. 2011zx08008-002), National Natural Science Foundation of China (No. 31271597).

转基因重大专项 (No. 2011zx08008-002)，国家自然科学基金 (No. 31271597) 资助。

网络出版时间：2015-09-17 网……