梁航华，高洪燕，徐曼，谭鹏，崔红娟西南大学　家蚕基因组生物学国家重点实验室，重庆　400716



家蚕BmBrat基因的克隆与鉴定

梁航华，高洪燕，徐曼，谭鹏，崔红娟
西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室，重庆400716

梁航华, 高洪燕, 徐曼, 等. 家蚕BmBrat基因的克隆与鉴定. 生物工程学报, 2016, 32(3): 375–384.

Liang HH, Gao HY, Xu M, et al. Cloning and characterization of BmBrat in silkworm, Bombyx mori. Chin J Biotech, 2016, 32(3): 375–384.

摘 要:NHL家族蛋白具有调控细胞增殖与分化的功能，在哺育动物中被广泛研究。本文克隆得到家蚕NHL蛋白家族成员BmBrat基因，通过RACE技术获得该基因cDNA全长序列为3 614 bp，其ORF为2 580 bp，编码859个氨基酸，预测其蛋白分子量为94.3 kDa，等电点为6.65。利用RT-PCR技术检测其在五龄3 d家蚕各组织表达情况，结果表明其在幼虫各组织均有表达，包括丝腺、中肠、脂肪体、马氏管等，且卵巢和头部表达量最高；胚胎时期表达谱分析显示其在胚胎发育第4天和第5天有高量表达。经原核表达、蛋白纯化及免疫小鼠后获得家蚕BmBrat多克隆抗体，且Western blotting及免疫荧光检测显示该抗体可以特异检测家蚕BmBrat蛋白；免疫荧光结果表明BmBrat蛋白定位于家蚕血细胞胞质中，为进一步研究BmBrat基因的生物学功能奠定了基础。

关键词:家蚕，BmBrat基因，表达谱，抗体制备，亚细胞定位

Received: July 17, 2015; Accepted: November 14, 2015

Supported by: National Natural Science Foundation of China (No. 81201551), the Research Fund for the Doctoral Program of Higher Education of China (No. 20130182110003), the Natural Science Foundation of Chongqing (No. CSTC2013jcyjys0007), the Fundamental Research Funds for the Central Universities (Nos. XDJK2013B020, SWU111014).

国家自然科学基金 (No. 81201551)，高等学校博士学科点专项科研基金 (No. 20130182110003)，重庆市科委自然科学院士基金 (No. CSTC2013jcyjys0007)，中央高校基本科研业务费专项资金 (Nos. XDJK2013B020, SWU111014) 资助。

NHL家族的名字源于发现的3个成员：NCL-1、HT2A和LIN-41，这3个因子与RNA代谢有关系，可能参与转录后基因的表达调控[1]。研究表明，NHL家族的成员均含有3个保守的基序：1个RING、1个或是2个B-box和1个coiled-coil[2]。在调节Brat (Brain tumor) 蛋白的活性中NHL结构起了至关重要的作用[3]。……