毕军，王强，孙文



Vero细胞微载体放大培养技术研究

毕军，王强，孙文

作者单位：430081 武汉科技大学医学院（毕军、王强）；200080 上海聆海生物科技有限公司（毕军）；430207 武汉生物制品研究所有限责任公司（孙文）

目前，国内大部分疫苗企业仍采用传统的转瓶细胞培养工艺来生产病毒性疫苗，该方法存在细胞密度低、病毒滴度低、劳动强度大等缺点。20 世纪 70 年代，建立了微载体/生物反应器培养动物细胞的工艺［1］，把悬浮培养和贴壁培养两种培养工艺融合在一起，兼有两者的优点，使得动物细胞工业化的大规模、高密度培养，以满足生物技术发展的需要，而细胞微载体放大培养就是其中的关键技术之一［2］。

本文通过胰酶消化微载体上 Vero 细胞，实现了 5 L 到 50 L 生物反应器的放大培养，为后续更大规模的生物反应器培养 Vero 细胞，生产病毒性疫苗奠定基础并积累经验。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1细胞株Vero细胞，编号为 CCL-81，来自美国典型菌种保藏中心（ATCC）。

1.1.2微载体Cytodex-1 购于美国 GE Healthcare 公司，经 PBS 水化处理后使用。生物反应器应用中，微载体密度为 10 g/L。

1.1.3主要试剂细胞培养基 DMEM 购自美国 Gibco公司，加 8% ～ 10% 小牛血清，pH 7.0 ～ 7.2；细胞消化液为 0.25% 胰酶加 0.01% EDTA，其中胰酶购自美国 Gibco公司；EDTA 购自美国 Sigma 公司。

1.1.4主要设备C-Bio 型生物反应器为法国 Sysbiotech公司产品，工作体积 5 L 和 50 L。

1.2方法

1.2.15 L 生物反应器 Vero 细胞培养取 2 ～ 4 瓶生长良好的 10 L 转瓶 Vero 细胞，加入细胞消化液，待细胞层松散、细胞圆缩时，加入细胞培养液，经充分摇匀分散、合并，制成细胞悬液。

以 2.0 × 105个/ml 的细胞密度接种于 5 L 生物反应器。补加细胞培养液至罐体工作体积（5 L）。……