高效液相色谱测定金银花中科罗索酸的含量*

2016-06-18陈贺佳祁春雷姚德坤

林业科技 2016年3期

关键词：高效液相色谱法金银花

陈贺佳祁春雷姚德坤

（1.大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司，大兴安岭　165012；2.黑龙江省寒带森林植物生物工程技术中心，大兴安岭　165012）

高效液相色谱测定金银花中科罗索酸的含量*

陈贺佳1，2祁春雷1，2姚德坤1**

（1.大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司，大兴安岭165012；2.黑龙江省寒带森林植物生物工程技术中心，大兴安岭165012）

摘要：采用高效液相色谱测定金银花中科罗索酸含量的结果表明：科罗索酸进样浓度为0.20～1.01mg/mL时，与峰面积呈良好的线性关系；通过重复性试验、稳定性试验和回收率对该方法的精确度和准确度进行验证表明：该方法精确度和准确度良好，可用于金银花中科罗索酸含量的测定。

关键词：金银花；高效液相色谱法；科罗索酸

*“十二五”国家科技支撑计划农业领域研究任务（任务编号：2011BAD08B0303）

金银花为忍冬科植物忍冬、毛花或者山银花忍冬的初开或干燥花蕾，目前国内外大量研究表明，金银花中主要含有挥发油、黄酮类、三萜皂苷、有机酸等有效成分［1-3］，但尚未见到从金银花中检测并提取分离科罗索酸的报道。本文通过建立一种测定金银花中科罗索酸含量的高效液相色谱法，为分离提取金银花中科罗索酸的研究提供重要的科学依据。

1仪器与药品

1.1仪器

戴安高效液相色谱仪、UVD170U型紫外检测器、安捷伦TC-C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱。

1.2药品

科罗索酸标准品98.5％、金银花提取物、甲醇（色谱纯）、冰醋酸（色谱纯）、超纯水。

2试验方法

2.1标准溶液的制备

准确称取干燥至恒重的科罗索酸标准品50.6mg，置于25mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理10 min使其溶解，冷却至室温，再用甲醇定容，摇匀后用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得每1mL含科罗索酸1mg的标准溶液。

2.2样品溶液的制备

准确称取金银花提取物0.451g置于25mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理10 min使其溶解，冷却至室温，再用甲醇定容，摇匀后用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得样品溶液。

2.3色谱条件

色谱柱为TC-C18（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇∶水∶冰醋酸=82∶18∶0.2，流速1.0mL/min，检测波长205nm，柱温30℃。

2.4线性和范围

党务工作的生命力源于创新、兴于创新。每个基层单位的生产内容、工作性质、人员结构都各不相同，因此，基层党务工作不能生搬硬套，必须坚持贴近本部门、本单位的生产实际，积极寻找适合自己的工作方法，始终坚持以创新性的思维来开展党务工作。

准确吸取标准溶液0.5、1.0、1.5、2、2.5mL，分别置于5mL容量瓶中加入甲醇定容，即得到不同浓度的标准溶液，然后分别精密吸取10 μL注入液相色谱仪中，按色谱条件测定并记录峰面积。

2.5精确度试验

重复性试验分别精确吸取6份样品溶液10 μL注入液相色谱仪中，按色谱条件进行测定，然后根据线性方程计算样品中科罗索酸含量。

稳定性试验将样品溶液分别在放置0、1、2、3、4、5h时按色谱条件进行测定并记录峰面积，然后计算科罗索酸含量。

2.6准确度试验

分别精确吸取6份样品溶液，按样品溶液中科罗索酸含量的100％加入标准溶液进行测定并记录峰面积，然后计算回收率。

3结果与分析

通过线性试验得到标准溶液浓度和科罗索酸峰面积（表1），以科罗索酸峰面积（Y）为纵坐标，标准溶液浓度（X）为横坐标绘制标准曲线（图1），得到线性方程：Y=8.130 9X-8.098 6（r=0.999 6）。表明进样量为10 μL时，科罗索酸进样浓度在0.20～1.01mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

表1　线性试验测定数据

图1　科罗索酸标准曲线

3.2精确度试验

3.2.1重复性试验

通过重复性试验（图2，表2）可知：样品溶液中科罗索酸平均含量（n=6）为3.38％，RSD为0.907％，表明本方法重复性好。

图2　科罗索酸标准溶液及样品溶液高效液相色谱图

3.2.2稳定性试验

通过稳定性试验可知：样品溶液中科罗索酸平均含量（n= 6）为3.40％，RSD为1.78％，表明在5h内样品溶液稳定性良好，能够完全满足整个分析工作需要。

3.3准确度试验

通过准确度试验可知：科罗索酸的平均回收率为100.67％，RSD为1.18％。

4结果与讨论

采用安捷伦TC-C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，流动相为甲醇∶水∶冰醋酸=82∶18∶0.2，流速1.0mL/min，检测波长205nm，柱温30℃的色谱条件，通过外标法，从线性、精确度、准确性3个方面对金银花中科罗索酸定量分析方法进行验证。根据该方法测定本批金银花提取物中科罗索酸含量为3.38％，当进样浓度在0.20～1.01mg/mL时，与峰面积呈良好的线性关系；通过重复性试验和稳定性试验对该方法精确度进行验证，表明多次测定科罗索酸含量相对接近，其RSD分别为0.907％（＜2％）和1.78％（＜2％），说明该方法精确度较高；运用回收率方法对准确度进行验证，平均回收率（％）为100.67％，RSD（％）为1.18％（＜2％），回收率在98％～102％之间，说明该方法精确度和准确度良好，可用于金银花中科罗索酸含量测定。

参考文献

［1］中国药典1部［S］，北京：人民卫生出版社，2010版.

［2］王力川.金银花的化学成分及功效研究进展［J］.安徽农业科学，2009，37（5）：2036-2037.

［3］阮鸣，彭国平.金银花挥发油的萜类化学成分研究进展［J］.时珍国医国药，2005，16（1）：59-61.

［4］Toshihiro Miura，Yasushi Itoh，Tetsuoinduces GLUT4 translocation in geneti BiolPharmBull，2004，27（7）：1103-1105.

［5］纵伟，夏文水.大叶紫薇叶中corosolic acid的分离和测定［带作物学报］，2006，27（2）：103-107.

［6］胡长平，陈龙胜，蔡群兴，等.反相高效液相色谱法测定枇杷叶中的科罗索酸［J］.色谱，2006，24（5）：492-494.

［7］刘博，杨艳芳，吴和珍.HPLC法测定山茱萸中科罗索酸的含量［J］.药物分析杂志，2011，31（12）：2217-2219.

［8］吴哲，李小玉，吴晓东，等.HPLC法测定桑叶和沙棘叶中科罗索酸的含量［J］.山西农业科学，2014，42（11）：1169-1171.

（责任编辑：李丹）

中图分类号：S567.7+9，TQ460.7+2

文献标识码：A