徐海春，王 伟，徐晓东▲

（1上海市黄浦区半淞园社区卫生服务中心口腔科, 上海 200011；2.上海市同仁医院口腔科, 上海 200336）

用cre-loxp鼠研究Runx2在釉质发育中的作用

徐海春1，王 伟2，徐晓东2▲

（1上海市黄浦区半淞园社区卫生服务中心口腔科, 上海 200011；2.上海市同仁医院口腔科, 上海 200336）

目的 为研究Runx2基因缺失对牙釉质发育的影响，拟建立Runx2基因条件性敲除的小鼠动物模型。方法 利用染色体位点特异性重组酶cre-loxp系统和FLP-frt的条件性基因打靶，借助于同源重组将两个同向的loxp位点置于Runx2基因的编码重要功能域外显子2两侧的内含子序列中，从而获得表型正常的Flox小鼠，为了提高ES细胞筛选的效率，插入被FRT位点瞄定的、作为选择性筛选的阳性标记neo基因，同时插入作为负性筛选的DTA，通过电转的方式，将构建成功的载体电导入到ES细胞，并通过对中靶的ES细胞进行筛选和鉴定，得到了同源重组正确的阳性克隆，通过显微注射，将中靶的ES细胞导入囊胚中，将囊胚移植到代孕鼠子宫内，最终得到嵌合体小鼠，将此嵌合体小鼠与FLP工具鼠杂交，利用FRT与FLP特异性识别，去掉neo基因即可获得阳性的loxp鼠，将其与组织特异性表达cre重组酶的转基因小鼠杂交，特异性表达的cre重组酶将介导loxp位点间的基因片段重组。小鼠出生后经PCR鉴别，获得Runx2基因条件性敲除的杂合子小鼠，条件性敲除的杂合子小鼠自交或与loxp纯合子小鼠杂交，小鼠出生后，PCR鉴别筛选条件性完全敲除的小鼠。RT-PCR法检测外源性Cre基因的表达。结果 构建了cre鼠、loxp鼠和Runx2基因条件性敲除的小鼠模型。……