唐井玉，李传峰，宫晓华，李琦,3，丁明洋,3，陈宗艳，王桂军，刘光清

（1.中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241；2.安徽农业大学动物科技学院，合肥230036；3.甘肃农业大学，兰州730070）



犬细小病毒SH14株VP2基因原核表达及免疫原性分析

唐井玉1,2，李传峰1，宫晓华1,2，李琦1,3，丁明洋1,3，陈宗艳1，王桂军2，刘光清1

（1.中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241；2.安徽农业大学动物科技学院，合肥230036；3.甘肃农业大学，兰州730070）

摘 要：根据犬细小病毒（Canine Parvovirus，CPV） SH14株基因序列设计引物，采用PCR方法扩增CPV VP2基因，经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后，将其克隆至pGEX-4T-1载体，构建重组表达载体pGEX-4T-VP2，经酶切鉴定和测序验证正确后转化大肠杆菌BL21中进行诱导表达，应用SDS-PAGE法检测蛋白的表达。然后，使用纯化的重组VP2蛋白制备其兔源多克隆抗体，分别应用蛋白免疫印迹、间接免疫荧光检测该抗体的免疫原性。结果表明，pGEX-4T-VP2能在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达，所制备的兔抗CPV-VP2抗体能与重组蛋白和病毒蛋白发生特异性反应。本研究为研发CPV亚单位疫苗、检测技术及致病机理研究等奠定了物质基础。

关键词：犬细小病毒；VP2基因；原核表达；免疫原性

犬细小病毒（Canine Parvovirus，CPV）属于细小病毒科，细小病毒属，该病毒属还包括猫泛白细胞减少症病毒（Feline panleukopenia virus，FPV）、水貂肠炎病毒（Mink enteritis virus，MEV）、猪细小病毒（Poecine parvovirus，PPV）、鹅细小病毒（Goose parvovirus，GPV）等，它们之间的相似性高达90%[1]。CPV是感染犬的重要病原之一，各种犬均能被感染，主要危害幼犬，特别是2月龄至6月龄幼犬。主要表现为急性出血性胃肠炎和幼犬急性心肌炎，传播速度快，发病率和死亡率高[2]。该病毒于1978年在美国首次发现，随后在加拿大、法国、日本、澳大利亚均有报道[3]。……