宫晓倩，阮宝阳,2，刘晓敏，张 鹏,2，汪 琪，汪秀会，周艳君，李泽君，童 武，郑 浩，童光志，于 海

（1. 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241；2. 山东农业大学动物科技学院，泰安 271000）



猪流感病毒新型核糖体移码蛋白PA-X特有序列的原核表达、纯化及鉴定

宫晓倩1，阮宝阳1,2，刘晓敏1，张 鹏1,2，汪 琪1，汪秀会1，周艳君1，李泽君1，童 武1，郑 浩1，童光志1，于 海1

（1. 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241；2. 山东农业大学动物科技学院，泰安 271000）

摘 要：核糖体移码蛋白PA-X是流感病毒的一种新型蛋白，为了研究该蛋白对于猪流感病毒的生物学特性的影响，我们进行了PA-X特有序列的原核表达、蛋白纯化及其鉴定。通过RT-PCR和重叠PCR方法扩增PA-X 特有序列的基因，利用基因重组技术构建原核表达载体，并进行菌液PCR和菌液测序鉴定，鉴定正确后克隆转化到BL21（DE3）中，进行蛋白表达及可溶性分析，同时用镍柱亲和层析法对其进行纯化。通过菌液PCR序列鉴定，PA-X特有序列的原核表达载体序列正确，编码框正确。转化BL21后目的蛋白表达成功，且大多数为可溶性蛋白。Western blot 结果表明制备的多克隆抗体具有良好的免疫反应性。

关键词：猪流感病毒；PA-X特有序列；原核表达；蛋白纯化；Western blot

猪流感病毒为正粘病毒科A型流感病毒属单股负链分节段的RNA病毒，分为8个节段。根据核苷酸长短，分别将它们命名为8个基因片段：节段1 （PB2基因），节段2（PB1基因），节段3（PA基因），节段4（HA基因），节段5（NP基因），节段6（NA基因），节段7（M1基因），节段8（NS1基因）[1]。同正链RNA病毒和DNA病毒相比，负链RNA病毒的主要特点是基因组RNA不具有……