丁明洋，戚伟强，陈宗艳，朱 杰，吴巧梅，缪秋红，李传峰，吴 润，刘光清

（1. 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241；2. 甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070）



一种新型鸭呼肠孤病毒SYBR Green II荧光定量PCR方法的建立

丁明洋1,2，戚伟强1,2，陈宗艳1，朱 杰1，吴巧梅1，缪秋红1，李传峰1，吴 润2，刘光清1

（1. 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241；2. 甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070）

摘 要：该研究旨在建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒（Novel duck reovirus，NDRV）的荧光定量PCR诊断方法。本实验以感染新型鸭呼肠孤病毒的鸭组织RNA提取物为模板，根据GenBank数据库中呼肠孤病毒S1基因全序列，设计合成了一对特异性引物，PCR扩增基因片段，将其克隆至pET-30a载体，重组质粒测序并进行同源性分析；以阳性质粒为模板，建立SYBR Green II荧光定量PCR检测方法，并进行敏感性和特异性检测。经测序证实扩增片段与预期目的片段相符，所建立的SYBR Green II荧光定量PCR检测S1的反应在101～108copies/uL之间具有良好的线性关系，反应的检出下限为10 copies/μL，而H5型禽流感病毒、H9型禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、C型鸭肝炎病毒、新城疫病毒、鹅细小病毒、鸭瘟病毒等病毒的检测为阴性，表明该方法敏感、特异。本研究成功建立了SYBR Green II荧光定量PCR检测新型鸭呼肠孤病毒的方法，为新型鸭呼肠孤病毒致病机制和机体免疫保护机制的研究提供了技术平台。

关键词：新型鸭呼肠孤病毒；S1；荧光定量PCR；熔解曲线；检测

禽呼肠孤病毒（Avian reovirus，ARV）属于呼肠孤病毒科，正呼肠孤病毒属成员。ARV相继从患有病毒性关节炎/腱鞘炎、心肌炎、矮小综合症、肠道疾病和“吸收不良综合症”等病的鸡体内分离出来[1]。……