雷　鹏　李娟娥　李　静　衣　蕾　姜小帆　吉海旺

陕西省人民医院 (西安 710068)



·实验研究·

息痛散对大鼠急性痛风性关节炎的作用*

雷鹏李娟娥李静衣蕾姜小帆吉海旺

陕西省人民医院 (西安 710068)

摘要目的：观察息痛散对尿酸钠晶体诱导的大鼠急性痛风性关节炎的作用。方法：通过关节局部注射尿酸钠晶体建立急性痛风性关节炎大鼠模型，将模型成功的大鼠随机分为模型组、别嘌醇组、息痛散高、中、低剂量组(18g/kg/d、36g/kg/d、72g/kg/d)，并灌胃治疗5d，观察各组大鼠的足跖肿胀度、步态学评分，并检测大鼠血清炎性因子白介素1- lβ (IL-lβ)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平。结果：息痛散呈剂量依赖性抑制急性痛风性关节炎模型大鼠关节足跖肿胀度，改善大鼠步态学评分，降低血清炎性因子IL-1β、TNF-α水平，息痛散高剂量组与别嘌醇组比较无统计学意义。结论：息痛散对尿酸钠晶体诱导大鼠急性痛风性关节炎足跖肿胀度有显著的改善作用，其机制可能是与抑制炎症反应有关。

主题词 关节炎，痛风性/中医药疗法炎症因子 实验，动物大鼠@息痛散

急性痛风性关节炎(Acute Gouty Arthritis，AGA)是嘌呤代谢紊乱引起尿酸水平增高或尿酸排泄减少导致尿酸盐结晶沉积于关节及周围组织，刺激关节而引起的关节滑膜及周围组织病损及急性炎症反应所致的一种代谢性关节疾病。随着生活方式的改变，近年来我国痛风的患病率呈逐年升高趋势，但目前尚缺乏安全、经济、有效的抗痛风药物。祖国医学经过数千年的发展，在治疗痛风方面有悠久的历史和丰富的临床经验。因此，结合中医理论，积极寻找开发抗痛风和改善炎症作用的中草药制剂具有重要的意义。本研究通过关节局部注射尿酸钠晶体诱导大鼠急性关节炎模型, 以观察息痛散对痛风性关节炎的影响及作用效果。

息痛散由石膏、忍冬藤、苍术、黄柏、全虫、桃仁、牛膝等组成，具有泻火解毒、祛湿通络的功效，临床应用及研究均发现该药具有缓解痛风性关节炎疼痛和降低血清尿酸的作用[1]，但尚无明确实验室证据支持。本实验通过观察息痛散对尿酸钠晶体诱导的大鼠急性痛风性关节炎的作用，来探讨其对痛风的防治作用及可能机制。

1材料与仪器

1.1实验动物清洁级健康SD大鼠，雄性，体重：200±20g。由西安交通大学实验动物中心提供。合格证号：陕医动字第08-005号。各组大鼠均常规饲养，并自由摄水、进食。

1.2药物与试剂别嘌醇购自上海信万象药业股份有限公司，批号：国药准字H31020334；尿酸钠购自Sigma公司，批号：U2875-5G；IL-1β、TNF-α放免试剂盒由北京北方生物技术研究所提供。息痛散颗粒：由生石膏、忍冬藤、苍术、黄柏、全虫、桃仁、牛膝等组成，中药配方颗粒，购自三九药业。

1.3主要仪器台式高速冷冻离心机(湘仪)；γ放射免疫计数器(Midwest-G)。

2方法

2.1动物分组、造模及给药

2.1.1 分组：将60只SPF级雄性SD大鼠适应性喂养1周后，采用随机数字表将大鼠随机分出8只为正常对照组，其余均复制模型。造模后，将模型成功的大鼠随机分为模型组、别嘌醇组、息痛散高剂量组、息痛散中剂量组、息痛散低剂量组，每组各8只。

2.1.2模型建立[2]：将大鼠右后踝关节屈曲，用手触摸，可扪及两骨突部，局部无菌操作后，用6号注射针自两骨突间进针，感觉有突破感后，证明针头进入踝关节内，注入0.2mL尿酸钠混悬液(浓度为100mg/mL)，正常对照组注入等量生理盐水。注射尿酸钠混悬液24h后，观察右后踝关节，如有明显肿胀，即表明模型复制成功。

2.1.3给药：造模后24h开始给药，均为灌胃治疗。息痛散低、中、高剂量用药剂量分别为18g/kg/d、36g/kg/d、72g/kg/d。别嘌醇组给药剂量为0.3mg/kg/d。各组均2次/d给药，连用5d，正常组及模型组予等剂量生理盐水。

2.2指标的检测

2.2.1 大鼠足跖肿胀度率的测定[3]：用记号笔在大鼠后肢踝关节周围作上记号，测量时将大鼠右后肢拉直并浸入玻管中，使踝关节标记与液面重叠，抽吸上升液体至原液面水平，读取所吸液体体积，此即实测足跖容积。分别于模型复制前、模型复制后24h，治疗后1、3、5d后进行测量。造模后足跖肿胀度率=(致炎后24h足容积-致炎前足容积)/ 致炎前足容积×100%，治疗后足跖肿胀率=(给药后不同时间足容积-给药前足容积)/ 给药前足容积×100%。

2.2.2 大鼠步态学评分：造模后24h、48h观察大鼠步态。Ⅰ级：正常行走；Ⅱ级：轻微跛行，受试下肢略有弯曲；Ⅲ级：中度跛行，受试下肢刚触及地面；Ⅳ级：重度跛行，受试下肢离开地面，三足着地行走。

2.2.3血清炎性指标的检测:末次治疗24h后用10%水合氯醛溶液按0.3mL/100g剂量予腹腔内注射麻醉，腹主动脉取血，室温下放置1h，4000转/分，离心10min，取血清，按照放免试剂盒检测血清IL-1β、TNF-α。

3结果

3.1大鼠足跖容积的变化结果如表1所示，息痛散中、高剂量对尿酸钠所引起的足跖肿胀均具有一定的改善作用，并呈一定的剂量依赖性，高剂量组与别嘌醇组比较差异无统计学意义。

表1　息痛散对急性痛风性关节炎大鼠足跖肿胀率的影响±s)

注：与正常组相比△P<0.01；与模型组相比▲P<0.05 ，◇P<0.01；与别嘌醇组相比◆P<0.01；与息痛散低剂量组相比□P<0.01；与息痛散中剂量组相比：■P<0.01

3.2大鼠步态学评分与正常组相比，模型组大鼠活动减少，出现较严重跛行。与模型组相比，息痛散中、高剂量及别嘌醇组对大鼠步态有显著改善作用，而息痛散低剂量组无明显改善。

表2　息痛散对急性痛风性关节炎大鼠

注：与正常组相比△P<0.01；与模型组相比▲P<0.05 ，◇P<0.01

3.3息痛散队型大鼠炎症因子TNF-α、1L-1β的影响如表2示，与模型组比较，别嘌醇组和息痛散组含量均显著降低(P<0.05)。

表3　息痛散对急性痛风性关节炎

注：与正常组相比△P<0.01；与模型组相比▲P<0.05 ，◇P<0.01；与别嘌醇组相比◆P<0.05；与息痛散低剂量组相比□P<0.05

4讨论痛风(gout)是单钠尿酸盐沉积于骨关节、肾脏和皮下等部位，引发的急、慢性炎症和组织损伤，与嘌呤代谢紊乱及(或)尿酸排泄减少所致的高尿酸血症直接相关，属于代谢性风湿病范畴，已经成为临床的常见病、多发病。急性痛风性关节炎是由于尿酸盐结晶沉积引起的炎症反应，常因受寒、劳累、饮酒、高蛋白高嘌呤饮食及外伤等诱发[4]。TNF-α、IL-lβ等炎症因子是引起关节炎症反应的关键因子[5-6]，参与了尿酸钠诱导的关节组织免疫炎症反应。本研究采用将尿酸钠晶体注入大鼠关节腔内制备的急性痛风性关节炎动物模型，其病理表现与临床相似，是痛风性关节炎药物筛选的经典造模方法。

痛风性关节炎属于祖国医学“痹证”、“历节病”、“痛风”范畴。其名最早记载于梁代陶弘景《名医别录》，如“百节痛风无久新者”。目前认为主要因劳倦过度，或七情内伤，或酗酒食伤，或关节外伤，或复感外邪等因素诱发下，体内蓄积的痰浊日久化热，致热毒、痰湿凝滞于关节，形成红、肿、焮热及剧痛。因此，该病证属湿热瘀毒，或邪热炽盛，痰浊、热毒、瘀血共同为病。此时邪气虽盛，正气未虚，表现为实证。息痛散方中生石膏，辛甘性寒，入足阳明，兼入手太阴、少阳，质重降火、气轻泄热；忍冬藤清热解毒、活血祛风、宣泄风热，两药共为君药；苍术、黄柏一方面清热解毒助石膏之力，另一方面清热燥湿化痰；全虫、桃仁化瘀通络止痛，助君药之用合而为臣药；川牛膝除活血通经外，更具引药下行之功，使诸药直达病所。全方共奏清热泻火、燥湿化痰，祛瘀通络之效。

本研究通过研究息痛散对尿酸钠晶体诱导的大鼠急性痛风性关节炎的作用，结果发现息痛散呈剂量依赖性抑制急性痛风性关节炎模型大鼠关节足跖肿胀度，改善大鼠步态学评分，降低血清炎性因子IL-1β、TNF-α水平。息痛散对尿酸钠晶体诱导大鼠急性痛风性关节炎足跖肿胀度有显著的改善作用，其机制可能是与减少炎症损伤有关。

参考文献

[1]雷瑗琳. 吉海旺教授学术思想总结及治疗痛风性关节炎临床研究[D]. 中国中医科学院，2012:45-69.

[2]Coderre TJ, Wall PD. Ankle joint urate arthritis in rats provides a useful tool for the evaluation of analgesic and anti-arthritic agents[J].Pharmacol Biochem Behav. 1988,29(3):461-6.

[3]徐叔云, 卞如濂, 陈修, 等. 药理学实验方法学[M]. 第3版. 北京: 人民卫生出版社, 2002:920-921.

[4]葛均波, 徐永健. 内科学[M]. 第8版. 北京: 人民卫生出版社, 2014:856-859.

[5]So A, De Smedt T, Revaz S, Tschopp J. A pilot study of IL-1 inhibition by anakinra in acute gout[J]. Arthritis Res Ther，2007,9(2):R28.

[6]Giovine FS, Malawista SE, Thornton E, Duff GW. Urate crystals stimulate production of tumor necrosis factor alpha from human blood monocytes and synovial cells. Cytokine mRNA and protein kinetics, and cellular distribution[J].J Clin Invest，1991,87(4):1375-81..

(收稿2016-01-03；修回2016-01-23)

The effect of xitong powder on acute gouty arthritis in rats

Shaanxi Provincial People’s Hospital(xi’an,710068)

Lei pengLi Juan’eLi Jinget al

ABSTRACTObjective :To study the effects and mechanisms of Xitong Powder on Acute Gouty Arthritis in rats. Methods :The rats of Acute Gouty Arthritis stimulated by monosodium urate crystals were divided randomly according to body weight into Models, Allopurinol group, Xitong Powder Ⅰgroup(18g/kg/d)，Xitong PowderⅡgroup(36g/kg/d)，Xitong Powder Ⅲ group(72g/kg/d), and 8 normal SD rats as normal control group. All rats were treated by corresponding drugs or physiological saline for 5 days. The ankle jionts’ swelling degree and gait profile score were tested at different time, and plasma IL-1β、TNF-α levels were tested by Radioimmuno assay at the end of the experiment. Results:Xitong Powder dose-dependently decreased ankle jionts’ swelling degree and improved gait profile score, and induced the levels of serum IL-1β, TNF-α in Acute Gouty Arthritis rats stimulated by monosodium urate crystals. There was no difference between Allopurinol group and Xitong PowderⅢ group. Conclusion Xitong Powder decreased ankle jionts’ swelling degree in Acute Gouty Arthritis rats stimulated by monosodium urate crystals. The mechanism is possibly mainly related to inflammatory parameters.

KEY WORDSArthritis, Gouty/traditional Chinese Medicine therapyInflammatory parameters Animal，ExperimentationRats @Xitong Powder

【中图分类号】R684.3

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7369.2016.04.059

*陕西省科学技术研究发展计划项目(陕西省科技惠民

专项2013K14-02-10)