刘金鑫　项珍珍　徐晶晶　白辰光③



胃腺癌内镜活检和术后标本HER-2表达的一致性分析

刘金鑫①项珍珍②徐晶晶②白辰光②③

摘要目的：分析胃腺癌内镜活检和术后标本HER-2蛋白表达状态的一致性，探讨胃腺癌内镜活检标本HER-2检测结果对应用曲妥珠单抗治疗的指导价值。方法：选取2013年3月至2014年2月上海长海医院病理科诊断明确的胃腺癌内镜活检标本及相应的肿瘤根治手术切除标本167例，并收集相关临床病理资料。采用免疫组织化学（immuno histochemistry，IHC）方法检测内镜活检标本的HER-2蛋白表达情况，用IHC及原位荧光杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）方法检测相应肿瘤手术切除标本的HER-2蛋白表达和基因扩增状况，对检测结果进行比较，并结合临床病理特征进行分析。结果：167例根治标本中，共有18例（10.8%）HER-2检测呈阳性，其中包含10例IHC 3+与8例IHC 2+且FISH+的病例。相对应的内镜活检标本与根治手术标本的IHC检测结果的一致率为82.0%，剔除IHC 2+的样本后，真阳性率和真阴性率分别为73.3%和97.0%。结论：内镜活检标本HER-2蛋白IHC检测具有较好预测价值，根治与活检标本不一致的主要原因是肿瘤表达的异质性。通过提高内镜活检标本取材数，并结合FISH检测结果，可以减少误判。

关键词胃腺癌HER-2内镜活检根治手术免疫组织化学荧光原位杂交

作者单位：①第二军医大学学员队（上海市200433）；②上海长海医院病理科；③第二军医大学病理学教研室

胃癌是当前威胁人类生存最严重的疾病之一，我国是胃癌的高发地区，发病率高于欧美，略低于日韩，总例数居全球第一［1］，且发现时多已至晚期，难以行手术切除，目前尚无更好的治疗手段，生存率较低［2］。研究证实，酪氨酸激酶受体（RTKs），如HER-1、 HER-2、HER-3等的过表达预示更差的预后［3］。国内外ToGA研究证实曲妥珠单抗联合化疗可改善HER-2阳性晚期胃癌患者的生存［4-7］，这项成果已逐步应用于临床。然而，对于HER-2基因的检测，晚期患者只能用内镜活检标本评估，因此活检标本对于肿瘤整体HER-2表达情况评估的一致性，对于用药有重要指导意义。

本研究对2013年3月至2014年2月上海长海医院收治的167例胃腺癌患者的临床病理特征、HER-2表达情况及异质性进行统计学评估，分析活检标本与术后标本HER-2表达状况的一致性，为仅能行内镜活检而不能行手术切除的患者提供用药指导。

1　材料与方法

1.1材料

收集2013年3月至2014年2月上海长海医院病理科诊断明确的胃腺癌内镜活检标本及相应的肿瘤根治手术切除标本167例，所有患者术前未经放化疗及免疫治疗，其中男性104例、女性63例，年龄23～81岁。所有标本均经10%的中性福尔马林液固定，石蜡包埋，常规H&E染色。所有H&E切片均由2名病理医生在光镜下观察，进行病理诊断及分型。

1.2方法

1.2.1免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）检测内镜活检和根治术标本均使用Leica BONDMAX全自动免疫组织化学仪进行HER-2蛋白检测，HER-2抗体采用丹麦DAKO公司的A0485（1：400），采用pH=6.0柠檬酸缓冲液热修复20 min进行抗原修复。结果评价依照《胃癌HER-2检测指南》［8］进行。1.2.2荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridiza⁃tion，FISH）检测根治手术标本使用北京金菩嘉公司的HER-2基因扩增检测试剂盒，FISH检测HER-2基因扩增状态，评价标准依照《胃癌HER-2检测指南》［8］。

1.3结果处理及分析

首先，统计分析根治手术标本IHC与FISH检测的HER-2表达情况，明确最终表达状态，将根治标本中IHC 3+或者IHC 2+且FISH+的病例定义为真阳性病例。然后分析内镜活检标本与根治手术标本HER-2表达状况的差异，以评估活检标本HER-2表达状况与整体HER-2表达状态的一致性。最后，筛选出根治手术标本与内镜活检标本表达不一致的病例，分析相关病理信息，查找原因和解决办法。

2　结果

2.1根治手术标本HER-2表达情况

167例患者的根治手术标本HER-2表达情况，共有10.8%（18/167）HER-2呈阳性，其中包含10例IHC 3+与8例IHC 2+且FISH+的病例。根治手术标本FISH与IHC法检测的HER-2表达情况基本一致，FISH阴性的143例中IHC 0/1+的137例，IHC 2+的6例；FISH阳性的21例中只有2例IHC 0/1+，其余病例均为IHC 2+/3+，；FISH可疑的3例被剔除（表1）。

2.2内镜活检与根治手术标本HER-2评判结果的比较

根治手术标本与内镜活检标本的IHC检测HER-2表达差异（表2），一致的病例共计137例（82.0%），其中包括IHC 0/1+的124例、IHC 2+的4例和IHC 3+的9例。由于活检标本未行FISH检测，于是剔除IHC 2+的样本，将IHC 3+计为HER-2阳性，IHC 0/1+计为HER-2阴性，计算结果显示内镜活检标本HER-2 IHC检测的真阳性率为73.3%（11/15），真阴性率为97%（128/132），其阴性评价的准确度优于阳性评价的准确度。而内镜活检标本IHC 2+共20例，其中根治手术标本HER-2阳性的3例，且均为肠型腺癌。

表1　根治标本IHC与FISH对于HER-2检测情况的差异　例Table 2　Radical specimen differences during HER-2 detection by IHC and FISH　n

表2　活检与根治标本IHC检测情况差异　例Table 3 Biopsy and radical specimen differences during IHC testing n

3　讨论

胃癌作为常见恶性肿瘤，对健康危害极大，我国胃癌发病率高，且发现时多为进展期，难以行手术切除［9］，因此通过药物治疗可延长生存期。近年来研究表明，曲妥单抗类药物能显著延长HER-2阳性胃癌患者的生存时间［10-12］，但我国胃癌发现时多处于进展期，众多患者只有内镜活检标本，无法行根治手术取出完整的肿瘤标本评估。本研究目的是评估内镜活检标本与根治手术标本HER-2表达的一致性，并以此指导临床药物使用。

本研究首先分析手术标本的阳性率与表达情况，术后标本IHC与FISH法检测HER-2表达结果基本一致。167例患者共有10.8%（18/167）的根治标本HER-2呈阳性，略低于ToGA实验［4］，可能是本研究病例中进展期患者较多，略高于国外实验［6］，可能与其例数较少有关。FISH阴性的143例中IHC 0/1+137例，IHC 2+ 6例，而FISH阳性的20例中，只有2例IH 0/1+。所以在对根治标本进行最终HER-2结果评估时，FISH作为IHC 2+病例的辅助判断标准来使用，这与国内类似研究一致［13］。

本研究分析内镜活检标本HER-2表达与根治手术标本HER-2的差异。结果显示，IHC方法总的一致性为82.0%（137/167），由于活检标本缺少FISH数据，剔除IHC 2+样本后的真阳性率为73.3%（11/15），真阴性率为97.0%（128/132），20例内镜活检IHC 2+标本所对应的根治手术标本HER-2阳性为3例。内镜活检标本与根治手术标本HER-2检测结果具有较高的一致性，但真阳性率略低，这与国外研究结果类似［14］，内镜活检HER-2阳性的患者还需要进一步分析，相关原因可能是胃肿瘤组织HER-2表达的异质性［15］，浅表组织较深部组织HER-2表达更强。

本研究分析根治手术与内镜活检标本评估病例不一致的原因，最终可评估为8例，由于内镜活检标本取的只是肿瘤表面的一部分组织，肿瘤异质性使内镜活检组织难以反映整体状况。针对此现象，国外学者建议取更多的（6～8块）活检标本来提高检测结果的准确度［15］，本研究的内镜活检标本取材块数为2～7块，判断偏差较大的患者大部分活检标本数都较少，为2～4块，这可能是不够准确的重要原因。

综上所述，本研究整体分析胃腺癌内镜活检标本HER-2 IHC检测结果与根治手术标本HER-2检测结果的一致性。内镜活检标本IHC检测阴性对于HER-2阴性的鉴别准确度较高，但若IHC检测结果为IHC 3+或IHC 2+，由于存在肿瘤表达异质性等原因，还需谨慎判断。

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（2016-01-04收稿）

（2016-04-05修回）

（编辑：杨红欣校对：孙喜佳）

刘金鑫专业方向为肿瘤病理学诊断。E-mail：83791663@qq.com

·临床研究与应用·

Consistency analysis of gastric cancer HER-2 expression among endoscopic biopsy and radical operation specimens

Jinxin LIU1，Zhenzhen XIANG2，Jingjing XU2，Chenguang BAI2，3

1The Second Military Medical University，Shanghai 200433，China；2Department of Pathology，Shanghai Changhai Hospital，The Second Military Medical University，Shanghai 200433，China；3Department of Pathology，The Second Military Medical University，Shanghai 200433，China

Correspondence to：Chenguang BAI；E-mail：blk709@sina.com

AbstractObjective：To analyze the consistency of HER-2 expression among endoscopic biopsy and radical operation specimens of gastric adenocarcinoma and to investigate the clinical application value of HER-2 detection in trastuzumab treated patients.Methods：From March 2013 to February 2014，167 patients from Shanghai Changhai Hospital were diagnosed with gastric adenocarcinoma using endoscopic biopsy specimens.The corresponding surgical specimens were collected for pathological analysis.The relevant clinical and pathological data were collected.HER-2 protein expression of endoscopic biopsy specimens was detected by immunohistochemistry （IHC）.HER-2 protein expression and gene amplification status of the corresponding tumor resection specimens were detected by IHC and fluorescence in situ hybridization（FISH）.Results were analyzed for clinicopathological characteristics.Results：Among the 167 cases，18 cases（10.8%）were HER-2 positive，including 10 cases showing IHC3+ and 8 cases showing IHC2+ with FISH positive.The consistency rate result among endoscopic biopsy and surgical operation specimens was 82%.Excluding the cases showing IHC2+，the true positive rate and the true negative rate were 73.3%and 97.0%，respectively.Conclusion：HER-2 detection of endoscopic biopsy specimen by IHC shows great predictive value.The main reason for the difference of surgery and biopsy specimens is the heterogeneity of tumor expression.Increasing the number of specimens and combined testing with FISH are important methods to reduce misjudgement.

Keywords：gastric adenocarcinoma，HER-2，endoscopic biopsy，radical operation，immunohistochemistry，fluorescence in situ hybridization

doi：10.3969/j.issn.1000-8179.2016.10.013

通信作者：白辰光blk709@sina.com

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