反相高效液相色谱法测定盘龙七中w(岩白菜素)*

2016-06-05高苏亚唐一梅

化工科技 2016年3期

张韫，高苏亚，唐一梅

(西安医学院药学院，陕西西安 710021)

盘龙七(RhizomaBergeniaeScopulosae)为虎耳草科岩白菜属植物秦岭岩白菜BergeniaScopulosaT.P.Wang的根茎[1]，在陕西眉县及秦岭地区称为盘龙七。盘龙七作为“太白七药”之一[2]，具有滋补强壮、止血、祛痰止咳、补益脾胃、收涩固肠、利水活血、活血化瘀、祛风除湿、消肿止痛等功效[3]。通过对盘龙七进行提取、分离、纯化及结构鉴定，确定岩白菜素(Bergenin)为盘龙七的有效成分之一[4]。岩白菜素属于异香豆素类化合物，又名矮茶素，佛手配质，鬼灯檠素，Bergenit，Vakerint，Arolisicacid B，Cuscutin，Peltaphorin[5]，具有止咳祛痰、抗炎、护肝、抗溃疡和提高免疫力等作用[6]。

采用高效液相色谱法测定岩白菜素已有文献报道。由于文献所用方法实验操作较为复杂[7-8]，故作者提出一种操作简便、重复性好、回收率高的测定盘龙七中岩白菜素含量的反相高效液相色谱法，为盘龙七这一陕西地方药材的充分利用和质量控制提供实验参考。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

盘龙七药材：分别购自陕西镇安县、勉县、户县药材市场，经西安医学院药学院生药教研室汪兴军老师鉴定为虎耳草科秦岭岩白菜BergeniaScopulosaT.P.Wang；岩白菜素对照品：批号477907，质量分数98%，上海士锋生物科技有限公司；乙腈、甲醇：色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；其余试剂均为市售分析纯；实验所用水为超纯水。

高效液相色谱仪：配置为P680四元泵、真空在线脱气机、UVD170U紫外检测器、Chromeleon数据处理软件，美国戴安公司；KLZ-UV艾柯超纯水机：成都唐氏康宁科技发展有限公司；KQ5200DE型数控超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；R201L旋转蒸发仪：上海申生有限公司；FW200A高速万能粉碎机：北京科伟永兴仪器有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱Agilent TC-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相：乙腈-φ(磷酸)=0.2%溶液(体积比为10∶90)；UV检测波长275 nm；流速1.0 mL/min；柱温为室温；进样量为20 μL。在该色谱条件下，岩白菜素与盘龙七中其它成分得到较好的分离，无干扰，专属性强，结果见图1。

t/mina

t/minb图1 岩白菜素对照品(a)和盘龙七供试品(b)色谱图

1.2.2 对照品溶液配制

精密称取岩白菜素对照品5.2 mg于10 mL容量瓶，用甲醇溶解并稀释至刻度；经0.45 μm微孔滤膜过滤，即得0.52 mg/mL储备液，置于4 ℃冰箱备用。精密吸取储备液0.2、0.4、0.6、1.0、1.2和2.0 mL于10 mL容量瓶，加甲醇稀释至刻度，配制成一系列浓度的对照品溶液。

1.2.3 供试品溶液配制

取盘龙七药材，于60 ℃下烘干，打成粗粉，过孔径0.25 mm的筛网，称取上述粉末约2 g置于具塞锥形瓶，加入16 mL体积分数50%乙醇溶液；采用超声提取法，提取3次，每次30 min；将提取液分别抽滤，合并滤液，用旋转蒸发仪浓缩至10 mL；精密移取1.0 mL于25 mL容量瓶，加甲醇稀释，定容摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤即得供试品溶液。

2 结果与讨论

2.1 方法学考察

根据《中国药典》2015版(四部)药品质量标准分析方法验证指导原则，考察样品的线性关系、精密度、重复性、加样回收及含量测定等。

2.1.1 线性关系考察

将上述对照品溶液按1.2.1项下色谱条件进行测定，以岩白菜素峰面积为纵坐标(Y)，岩白菜素对照品质量浓度为横坐标(X)绘制标准曲线，见图2。所得线性回归方程为Y=251.26X-1.368 6，相关系数r=0.999 7。结果表明ρ(岩白菜素)在1.04×10-2～0.104 mg/mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。

ρ(岩白菜素)/(mg·mL-1)图2 ρ(岩白菜素)的标准曲线图

2.1.2 精密度实验

配制ρ(岩白菜素)=0.052 mg/mL对照品溶液，按1.2.1项下的色谱条件重复进样6次，测定色谱峰面积，得w(岩白菜素)，并计算RSD=1.8%，见表1，结果表明精密度符合要求。

表1 岩白菜素的精密度实验(n=6)

2.1.3 重复性实验

精密称取同一批样品粉末6份，每份约2 g，按1.2.3项下的方法制备6份供试品溶液，按1.2.1项下的色谱条件分别进样，测定色谱峰面积，得w(岩白菜素)，并计算RSD=0.9%，见表2，结果表明重复性符合要求。

表2 岩白菜素的重复性实验(n=6)

2.1.4 稳定性实验

精密吸取同一供试品溶液，按1.2.1项下色谱条件分别于0、2、4、6、8和10 h进样，测定色谱峰面积，并计算得RSD为1.3%，见表3。结果表明供试品溶液10 h内稳定，实验应在岩白菜素稳定时间内完成。

表3 岩白菜素的稳定性实验(n=6)

2.1.5 加样回收实验

取同一批样品9份，约2 g，其中m(岩白菜素)=0.208 0 g，按1.2.3项下的方法制备供试品溶液，分别精密加入质量浓度为0.104、0.260和0.350 mg/mL对照品溶液，定容摇匀，按1.2.1项下的色谱条件分别进样测定，计算得高、中、低3个浓度的平均回收率依次为101.1%、100.3%、101.0%，RSD为0.6%，见表4。结果表明该方法具有良好的回收率。