●田斯琦 刘日强 杨华伟

初探在RSK4变异体3的相互作用蛋白

●田斯琦 刘日强 杨华伟

目的：寻找RSK4(核糖体S6蛋白激酶4)第3变异体的相互作用蛋白，以便于为后续研究其分子机制及在乳腺癌中的功能做铺垫。 方法：构建RSK4变异体3（RSK4m3）的过表达慢病毒，稳定转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中，使用蛋白印迹实验与实时荧光定量PCR检测变异体的蛋白及mRNA的表达情况，通过质谱鉴定找出互作蛋白。结果：稳定转染后，RSK4变异体的蛋白及mRNA表达水平均上调，质谱结果分析找出与RSK4m3有相互作用的Creb,insulin,Ppp2c等蛋白。结论：RSK4m3可能与Creb,insulin,Ppp2c有直接相互作用关系。

乳腺癌；RSK4;变异体；相互作用蛋白

乳腺癌，一个人们闻之色变的名词，根据最新的统计数据[1]，在中国每年的新诊断出的乳腺癌病例及死亡病例分别占全球的12.2%和9.6%，这一数值的持续升高，加速着我们对乳腺癌研究的不断深入。Berns K[2]及SUN Y[3]等人先后证明了，RSK4是抑制乳腺癌侵袭转移的重要因子，它能够抑制乳腺癌细胞的生长并诱导其衰老,但对于其通过mRNA可变剪接作用下行成的RSK4的变异体（RSK4 variants，RSK4m）我们却知之甚少。RSK4共有3个剪接变异体[3]，RSK4m3为其的第三变异体，缺失第19外显子的15个碱基和第21外显子，缺失碱基最多，研究也最有意义。本研究旨在寻找RSK4m3的相互作用蛋白，为今后研究其作用机制及生物学功能提供思路。

1 材料与方法

1.1 材料

（1）细胞系：人乳腺癌细胞株MDA-MB-231于里苏（上海）生物技术有限公司购买。

（2）主要试剂：Leibovitz’s L-15培养液于吉诺生物医药技术有限公司购买；阴性对照病毒CON145及RSK4m3慢病毒过表达载体LVRPS6KA6(9076-2)购于上海吉凯基因化学技术有限公司；……