石健　张雯婕　冯汛　胡雨婷　瑶池

(南通大学　江苏南通 226019)



尼罗红荧光染色法的优化及应用*

石健张雯婕冯汛胡雨婷瑶池

(南通大学江苏南通 226019)

摘要以自主筛选的小球藻为材料对尼罗红荧光染色进行条件优化，并用该方法追踪微藻在污水中的油脂含量变化。实验发现，微藻只有经过超声波破碎，染色才会出现荧光，DMSO的添加会增强荧光反应。最终确定其染色条件为：DMSO与藻液体积比为1∶5，超声波破碎5 min后染色5 min，NR质量浓度1.5 μg/mL。在其应用方面发现，微藻的油脂积累量只有培养基的一半，说明污水不利于微藻油脂的积累；最佳采收时期为平稳期，此时微藻的产量和油脂含量达到最高。

关键词小球藻尼罗红超声波污水油脂

0引言

微藻因其生长快速、产量大、油脂含量高成为生物柴油的热门候选来源[1]。其中，小球藻具有高耐污、高含油特性，可利用污水饲养节约生产成本。因其兼具再生能源与污水处理的特点[2]，小球藻在微藻生物柴油的研究中引起了人们的广泛关注。虽然已有大量的研究证明小球藻对污水处理的能力，但其在污水中的油脂积累情况却研究较少。油脂的产量直接决定微藻生物柴油的生产价值，监测污水中小球藻的油脂含量对其工业化生产具有重要意义。

尼罗红(Nile Red,NR)是一种脂溶性的荧光染料，可以准确地将细胞内脂类物质与其他贮藏物区分开[3], 因此经常被用于检测动物以及微生物细胞内油脂情况。尼罗红荧光染色法具有快速、简便、灵敏，样品需求量少且能连续活体检验等优点[4]，已在多种生物中证明了尼罗红荧光染色的准确性。……