谢鑫鑫 吴卫东 林碧英 林忠平 高山 钱昆

摘 要 枸橘（Ponarus trifoliata）是一类含植物气味成分较高的植物。从枸橘中分离气味物质合成的关键基因—脂氢过氧化物裂解酶（hydroperoxide lyase， HPL）基因，并构建35S启动子驱动下的表达载体，通过农杆菌介导的方法将其导入生菜中，经PCR和Southern杂交检测。结果显示：有数十个阳性植株，且经RT-PCR和Northern杂交鉴定HPL基因可在生菜中正常转录。

关键词 脂氢过氧化物裂解酶基因；生菜；遗传转化

中图分类号 S636.2 文献标识码 A

Abstract Ponarus trifoliata is a kind of plant with higher plant odor components. The key hydroperoxide lyase（HPL） gene encoding odorants synthesis was isolated from P. trifoliate， and the expression vector driven by 35S promoter was constructed， then was transferred into lettuce by Agrobacterium-mediated method. PCR and Southern blot showed dozens of strain had positive hybridization signals， RT-PCR and Northern blot showed that the HPL gene could be transcribed normally in the plant of lettuce.

Key words Hydroperoxide Lyase（HPL）gene； Lettuce； Genetic transformation

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2016.05.002

脂氢过氧化物裂解酶（hydroperoxide lyase，HPL）是一类血红素——铁硫蛋白，属于细胞色素P450（CytP450）类蛋白家族[1-3]，具有CytP450家族的普遍特征[4]。参与植物体内脂氧化途径，是脂氧合酶（lipoxygenase，LOX）下游的一个关键性酶，能催化脂氢过氧化物裂解产生短链的挥发性醛及相应的醇[5]，具有芬芳气味，是形成植物特异性气味的主要成分之一，被广泛用于食品和香水的添加剂，具有较高的经济价值。同时还与植物抗病虫、伤害、贮藏、老化等生理进程有关[6-13]。当植物受到病原菌侵染等生物胁迫或机械损伤等非生物胁迫时，植株HPL酶活性得到激活，通过LOX-HPL代谢途径生成绿叶挥发物产生防御反应[3，14-18]。

生菜（Lactuca sativa）营养丰富、鲜嫩爽口，是中国最受欢迎的生食绿叶蔬菜之一。然而，长期以来，人们对果蔬的研究主要集中在产量和抗性等方面，而作为果蔬的一个重要品质指标——香气，其遗传改良一直以来不被人们所重视。鉴于此，本研究从气味比较强的芸香科植物枸橘（Poncirus trifoliata）克隆HPL基因，构建表达载体pCAMBIA2300-35S-HPL-Tnos，转化根癌农杆菌后侵染生菜叶盘，获得转基因植株，以期提高其风味，改善品质，提高植株自身抗逆性和社会经济价值，为进一步应用基因工程技术改良生菜品种奠定基础。……