三黄鸡MAVS基因克隆及生物信息学分析
2016-05-30曹艳杰何怡宁王海勇唐宁张丽华韦平韦天超磨美兰
曹艳杰 何怡宁 王海勇 唐宁 张丽华 韦平 韦天超 磨美兰
摘要:【目的】掌握三黄鸡线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)基因的生物信息学,为MAVS基因誘导表达及禽类固有免疫相关机制研究打下基础。【方法】根据GenBank中已公布的原鸡MAVS基因序列设计1对特异性引物,采用RT-PCR扩增三黄鸡MAVS基因,并应用相关生物软件进行序列分析及其蛋白结构预测。【结果】三黄鸡MAVS基因编码区(CDS)全长1926 bp,编码641个氨基酸,与GenBank中已发表的原鸡MAVS氨基酸序列(NP_001012911.1)比对,三黄鸡MAVS氨基酸序列在第440、488、506和606位存在4个氨基酸差异,分别为440A→T、488P→L、506I→L和606E→K。三黄鸡MAVS基因与原鸡的相似性最高,达99.0%;与日本鹌鹑的相似性次之,为91.0%;与斑马鱼的相似性最低,仅37.6%。三黄鸡MAVS蛋白分子质量为67.79 ku,理论等电点(pI)为5.04,属于跨膜蛋白,无信号肽序列;其二级结构中折叠占0.5%,无规则卷曲占88.7%,螺旋占10.8%。【结论】三黄鸡MAVS基因序列表现出高度的保守性,可作为今后研究三黄鸡抗病毒机制的重要指标之一。
关键词: 三黄鸡;MAVS基因;克隆;生物信息学;相似性
中图分类号: S831.89 文献标志码:A 文章编号:2095-1191(2016)07-1216-06
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【研究意义】线粒体抗病毒信号蛋白(Mitochondrial anti-viral signaling protein,MAVS)是一种在宿主固有免疫信号通路中扮演重要角色的接头蛋白(Seth et al.,2005)。当宿主受RNA病毒感染,RNA解螺旋酶(RIG-I和MDA5)识别病毒衍生RNA配体后发生构象改变(Kowalinski et al.,2011),N端Caspase招募结构域(Amino-terminalcaspase recruitment domain,CARD)暴露出来,RIG-I/MDA5转移至线粒体外膜,并与MAVS的CARD相互作用,进而刺激下游的TBK1和IKK复合体分别活化NF-κB和IRF3固有免疫相关信号通路,诱导干扰素表达,最终参与抗病毒反应(杨星星等,2013)。因此,研究MAVS基因的生物信息学对其诱导表达及多克隆抗体的制备具有重要指导意义。……
