陈　燕, 张金娟, 张彦燕, 许键炜, 熊　英, 杨　勤

(1.贵州医科大学附属白云医院， 贵州 贵阳　550014； 2.贵州医科大学机能实验室， 贵州 贵阳，　550004； 3.贵州医科大学 药理学教研室， 贵州 贵阳　550004; 4.贵州医科大学 病理生理学教研室， 贵州 贵阳　550004)



鼻通宁喷雾剂鼻黏膜及皮肤刺激性试验*

陈燕1, 张金娟2**, 张彦燕3, 许键炜3, 熊英2, 杨勤4

(1.贵州医科大学附属白云医院， 贵州 贵阳550014； 2.贵州医科大学机能实验室， 贵州 贵阳，550004； 3.贵州医科大学 药理学教研室， 贵州 贵阳550004; 4.贵州医科大学 病理生理学教研室， 贵州 贵阳550004)

[摘要]目的： 研究鼻通宁喷雾剂对鼻黏膜及皮肤刺激性。方法: 将16只家兔分为对照组(8只)和给药组(8只)，进行鼻腔黏膜刺激性试验，对照组予赋形剂鼻腔给药，给药组予鼻通宁鼻腔给药，观察给药后家兔的全身状况及局部刺激症状，于末次给药后24 h和7 d时分别处死各组半数家兔，观察呼吸道局部黏膜组织情况，并进行病理组织学检查；另将16只家兔随机分为皮肤完整组及皮肤破损组，采用自身对照的方法，于两组家兔背部两侧皮肤去毛处分别涂抹鼻通宁喷雾剂及赋形剂，每次给药前及末次给药后30～60 min、24、48和72 h观察皮肤情况，并进行皮肤刺激反应评分和强度评价，于末次给药后72 h和4 d时，处死各组半数家兔，取涂药部位皮肤行病理组织学检查。结果： 鼻黏膜刺激性试验结果显示，给药组及对照组家兔均未出现全身反应及局部刺激症状，末次给药后 24 h及 7 d时所处死的两组家兔的鼻、喉、气管、支气管黏膜肉眼及镜下观察均未见异常；皮肤刺激性试验结果显示，皮肤完整组及皮肤破损组家兔给药部位皮肤均未见异常反应，皮肤刺激反应评分均为0分，皮肤刺激强度评价为无刺激性。结论： 鼻通宁喷雾剂无明显鼻腔黏膜刺激性及皮肤刺激性。

[关键词]中药； 鼻通宁； 鼻黏膜刺激性反应； 皮肤刺激性反应； 家兔

鼻通宁是一种由鹅不食草、辛夷、白芷等制成的纯中药喷剂,始载于《慈禧光绪医方选议》，在此基础上辅以冰片、菊花而成[1]。局部应用具有通窍开塞,消炎散毒功效,主要用于慢性鼻窦炎,感冒鼻塞,对鼻息肉有辅助治疗作用。近年来随着中药制剂在临床上的广泛应用，非口服途径给药经局部吸收后对给药部位及全身产生毒性作用的报道也逐渐增多，中药制剂带来的安全性问题越发引起重视。家兔广泛用于药物实验和动物疾病模型研究，是鼻黏膜及皮肤刺激性试验的理想动物[2-3]。为了探讨鼻通宁喷雾剂对鼻腔黏膜及周围的皮肤是否产生刺激性，本研究采用鼻通宁对家兔鼻黏膜及皮肤进行刺激性试验研究[4]，以期为临床使用鼻通宁的安全性提供理论依据。

1材料与方法

1.1实验材料

鼻通宁喷雾剂(批号20090701，10 mL/支)，赋形剂为无色液体，为鼻通宁喷雾剂所含辅料(贵州英利药业有限公司提供)；轮转式切片机(德国Leica)、显微镜(CX31型，日本Olympus公司)。白色家兔，雌、雄各半，一级实验动物(合格证号SCXK(黔)2002-0001)，由贵州医科大学实验动物中心提供。每笼饲养家兔1只，由专人饲养管理。饲以试验兔颗粒饲料(贵州医科大学实验动物中心提供)，自由饮水。动物室光照充足，通风设备良好，室温18～25 ℃，相对湿度50%～70%，实验室按常规定期消毒；适应性饲养1周后用于实验。

1.2试验方法

1.2.1鼻腔黏膜刺激性实验16只家兔，体重(2.16±0.28)kg，随机分为对照组(给赋形剂)和给药组(给鼻通宁喷雾剂)，每组8只，雌、雄各半。给药组按每只家兔0.2 mL的剂量经鼻腔滴入给予鼻通宁喷雾剂，对照组给予等剂量赋形剂，每天3次，连续2周。每次给药后观察家兔全身状况(如呼吸、循环、中枢神经系统)及局部刺激症状(如哮喘、咳嗽、呕吐、窒息等症状)等变化[4]。末次给药后24 h处死部分动物(每组4只)，观察呼吸道局部(鼻、喉、气管、支气管)黏膜组织有无充血、红肿等现象，并进行病理组织学检查。留存家兔继续观察其全身状况和局部变化，至末次给药后第 7 d 处死，取鼻、喉、气管、支气管组织作病理组织学检查[5-6]。

1.2.2皮肤刺激性实验另取16只家兔，体重(2.20±0.26)kg，雌、雄各半。试验前1 d剪净动物脊柱两侧被毛，每侧去毛面积10 cm×15 cm，并确保剪毛范围皮肤完好无损。剪毛后将动物随机分为完整皮肤组和破损皮肤组，每组8只。破损皮肤组于去毛部位用刀片划出“井”字型损伤，划伤以渗血为度。各组动物均于左侧去毛处涂抹鼻通宁喷雾剂，于右侧去毛处涂抹赋形剂，在左右两侧皮肤分别涂相应药物1.5 mL，每天3次，每次涂药前均用温水洗净涂药部位，待皮肤水分自然干燥后再行给药，连续2周。在每次去除药物后1 h以及再次给药前观察及记录皮肤有无红斑、水肿、色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄等情况，以及上述现象发生时间及消退时间，并对红斑及水肿进行评分[7]。末次贴敷后，在去除药物后30～60 min，24、48和72 h肉眼观察并记录涂敷部位有无红斑和水肿等情况，并按表1评分标准对皮肤刺激反应进行评分，按表2评价标准进行皮肤刺激强度评价。末次观察后处死部分动物(每组4只)取涂药部位皮肤作病理组织学检查，余下家兔继续停药观察，4 d后(停药后1周)处死所余动物，取涂药部位皮肤作病理组织学检查[5-6]。

表1　皮肤刺激反应评分标准

表2　皮肤刺激强度评价标准

1.3统计学处理

2结果

2.1鼻腔黏膜刺激性实验

给药期间及停药后7 d内各组动物毛皮光滑，进食、大小便正常，眼、鼻无异常分泌物，未出现哮喘、咳嗽、呕吐、窒息、呼吸加快或减慢、呼吸困难等症状，无一动物死亡。末次给药后 24 h及7 d所处死的对照组和给药组家兔鼻、喉、气管、支气管黏膜均未见充血、水肿或溃疡等异常改变。病理学检查：停药后 24 h对照组有1只动物鼻黏膜和喉黏膜有少量浆细胞、淋巴细胞浸润，喉黏膜充血，表现轻度慢性炎症，气管、支气管正常；对照组其余动物和给药组动物鼻、喉、气管、支气管均未见异常(图1)；停药后7 d，对照组和给药组家兔鼻、喉、气管、支气管黏膜均未见明显异常(图2)。

注： A 为给药组喉黏膜组织，B为对照组喉黏膜组织，C为给药组鼻黏膜组织，D为对照组鼻黏膜组织， E为给药组气管黏膜组织，F对照组气管黏膜组织，G给药组支气管黏膜组织，H为对照组支气管黏膜组织图1　末次给药后24 h时两组家兔鼻、喉、气管、支气管组织病理学检查(HE，×100)Fig.1　Histopathological examination of nose, throat, trachea, bronchus in both rabbits 24 hours after the last drug administration

注： A 为给药组喉黏膜组织，B为对照组喉黏膜组织，C为给药组鼻黏膜组织，D为对照组鼻黏膜组织，E为给药组气管黏膜组织，F为对照组气管黏膜组织，G为给药组支气管黏膜组织，H为对照组支气管黏膜组织图2　末次给药后第7天两组家兔鼻、喉、气管、支气管组织病理学检查(HE，×100)Fig.2　Histopathological examination of nose, throat, trachea, bronchus in both rabbits 7 days after the last drug administration

2.2皮肤刺激实验

在给药过程中及末次给药去除药物后30～60 min，24、48和72 h完整皮肤组和破损皮肤组家兔背部左右两侧给药部位皮肤均未见红斑、水肿，亦未见色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄等异常。病理检查显示，完整皮肤组及破损皮肤组动物，连续两周给药后停药72 h(图3)或停药后1周(图4)，其左侧(涂鼻通宁喷雾剂)及右侧(涂赋形剂)皮肤均未见水肿、出血、粒细胞浸润、变性、坏死等异常。

3讨论

鼻通宁喷雾剂是纯中药制剂，主要成分有鹅不食草、辛夷、白芷等。研究表明，辛夷花汤治疗鼻渊(即鼻窦炎)疗效显著[8]。临床上用于慢性鼻窦炎，感冒鼻寒，对鼻息肉有辅助治疗作用。但是，辛夷具有一定的毒性，临床使用具有“辛不过钱”的说法，过量使用可导致中毒不良反应[9]。据《本草纲目》记载，鹅不食草可以通鼻气、利七窍、吐风痰、塞鼻息自落。由于鼻通宁组成成分复杂，干扰因素较多，包括药物的活性成分或组分、配伍后产生的新成分、体内代谢、制药过程中的杂质、辅料及制剂的理化性质等均是可能导致给药部位毒性的因素。国家食品药品监督管理局(SFDA)发布的《中药、天然药物刺激性和溶血性的研究技术指导原则》强调中药、天然药物给药部位一般应选择与临床应用相同或相似的部位，并注意对可能接触到受试物的周围组织的影响。鼻通宁喷雾剂为鼻腔黏膜局部喷雾的非口服途径给药，为了更有效防止对鼻腔黏膜及周围的皮肤产生刺激性，通过该指导原则对家兔鼻黏膜及皮肤刺激性试验观察鼻通宁喷雾剂是否会产生刺激性，为临床使用的安全性提供理论依据。本试验中，鼻通宁喷雾剂家兔鼻腔给药，给药期间及停药后 1 周内各组家兔一般行为状况和鼻、喉、气管、支气管解剖学观察未见明显异常，鼻、喉、气管、支气管黏膜均未见明显病理学改变，提示鼻通宁喷雾剂家兔鼻腔给药，无明显的刺激性。

注：A为完整皮肤组左侧(鼻通宁)，B为完整皮肤组右侧(赋形剂)，C为破损皮肤组左侧(鼻通宁)，D为破损皮肤组右侧(赋形剂)图3　停药72 h时家兔涂药皮肤组织病理学检查(HE，×100)Fig.3　Histopathological examination of coating skin 72 hours after drug withdrawal

注：A为完整皮肤组左侧(鼻通宁)；B为完整皮肤组右侧(赋形剂)；C为破损皮肤组左侧(鼻通宁)；D为破损皮肤组右侧(赋形剂)图4　停药第7天时家兔涂药皮肤组织病理学检查(HE，×100)Fig.4　Histopathological examination of coating skin 7 days after drug withdrawal

本试验中，无论是完整皮肤或破损皮肤的连续两周多次给药，均未观察到家兔皮肤出现红斑、水肿等异常反应，按皮肤刺激性反应评分标准进行评分，各组动物得分均为0分；各组动物的左侧皮肤(涂鼻通宁喷雾剂)与右侧皮肤(涂赋形剂)反应无明显差异；按皮肤刺激强度评价标准可判断为鼻通宁喷雾剂无皮肤刺激性；病理组织学检查结果显示均未见明显异常，以上结果提示鼻通宁喷雾剂无明显皮肤刺激性。由于其组成成分复杂，虽然本次试验未见鼻通宁及赋形剂有明显刺激性，对其配伍中的相关物质是否有刺激性还需要进一步研究，解决喷雾剂中的辅料和相关物质问题，完善其质量标准，并密切观察用药过程中患者的反应，保证临床用药的安全性。

4参考文献

[1] 张何，史公良，张景云，等.鼻通喷雾剂的质量标准研究[J].中草药, 2007(38):1495-1497.

[2] 刘美宏，金哲虎.酒精对对苯二胺引起家兔皮肤刺激性的影响[J].中国皮肤性病学杂志， 2012(5):393-395.

[3] 万宏.黄术消肿洗剂多次给药对家兔皮肤刺激性实验[J].中国药物警戒杂志， 2013(6):328-329.

[4] 刘煜德,余玲,陈巧玲.冰片鼻粘膜刺激性实验观察[J].中国民族民间医药杂志, 2010(16):33-34.

[5] 《中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则》课题研究组． 中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则[M].北京:中国医药科技出版社， 2006:227-242．

[6] 中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学)[M].中华人民共和国卫生部药政管理局, 1994：213-215.

[7] 容丽霞，潘经媛，张同辉，等.洛索洛芬钠凝胶皮肤刺激和皮肤过敏[J].中国药理学与毒理学杂志, 2013(3):526.

[8] 李毅.自拟辛夷花汤治疗鼻渊 76例临床观察[J].中国民族民间医药杂志， 2014(5):40.

[9] 郑虎占.中药合理应用[J].中国临床医生杂志， 2008(6):17-18.

(2016-01-02收稿，2016-03-26修回)

中文编辑： 文箐颍； 英文编辑： 刘华

Experimental Research of Irritation of Bitongning Spray on Nose Mucosa and Skin

CHEN Yan1, ZHANG Jinjuan2, ZHANG Yanyan3, XU Jianwei3, XIONG Ying2, YANG Qin4

(1.TheAffiliatedBaiyunHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550014,Guizhou,China; 2.FunctionalLaboratory,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China; 3.DepartmentofPharmacology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China; 4.DepartmentofPathophysiology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To study the irritation of Bitongning spray on nose mucosa and skin in order to supply basis for administration of safe use. Methods: 16 rabbits were randomly divided into treatment group and control group). The treatment group received Bitongning spray by nasal cavity while control group was given excipients, 3 times a day for 2 weeks, respectively. General condition and local irritation symptom in rabbits of two groups were observed and compared after drug administration. Half of the rabbits were executed at 24 h and 7 days after the last drug administration respectively, and the local mucosal tissue of the respiratory tract was observed, and the pathological changes were examined. Another 16 rabbits were randomly divided into intact skin group and damaged skin group. Self contrast method was adopted in the part. The back skin on both sides of the two groups was smeared with Bitongning nasal sprays and excipient respectively at unhairing place 3 times a day for 2 weeks. The skin was observed before each drug administration, 30～60 min, 24 h, 48 h and 72 h after the last drug administration, and the skin irritation reaction score and intensity were evaluated. Also, half of the rabbits were executed at 24 h and 7 days after the last drug administration respectively, and the pathological changes of coating part of skin were examined. Result: Nasal mucous irritation test results showed that no systemic or local irritation appeared in treatment group and control group during the treatment. In the two group executed at 24 h and 7 days after the last drug administration, no abnormalities could be seen in nose, throat, trachea, the bronchial mucosa under naked eye or microscope. Skin irritation test results showed that intact skin group and damaged skin group had no abnormality during the treatment, the irritation reaction score was 0 and no skin stimulus intensity was showed. Conclusion: The Bitongning spray has no obvious irritation effect on rabbits' nose, mucosa and skin.

[Key words]Traditional chinese medicine; bitongning; nose mucosa irritation; skin irritation; rabbits

[中图分类号]R286； R276.1

[文献标识码]A

[文章编号]1000-2707(2016)04-0474-05

*[基金项目]贵州省科学技术基金[黔科合J字(2011)2285号]； 贵州省中医药管理局中医药、民族医药科学技术研究课题合同书(No：QZYY2013-91)

**通信作者 Email:826609585@qq.com

网络出版时间：2016-04-20网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160420.1827.034.html