刘兴梅， 苏　莉， 李贵芳， 吴　娴， 王茹蕾， 黄盛文

(贵州省人民医院 检验科， 贵州 贵阳　550002)



贵州地区重型β-地中海贫血基因突变类型分析*

刘兴梅， 苏莉， 李贵芳， 吴娴， 王茹蕾， 黄盛文**

(贵州省人民医院 检验科， 贵州 贵阳550002)

[摘要]目的： 了解贵州地区重型β-地中海贫血基因突变类型及分布情况。方法： 1 980例疑诊的β-地中海贫血贵州籍患者，采用反向斑点杂交技术对中国人群中8种常见和9种少见β-地中海贫血基因突变类型进行检测，对检出的突变基因型及其分布频率进行分析。结果： 共检出128例重型β-地中海贫血，其中纯合子62例，双重杂合子66例；共检出14种突变基因型，按分布频率大小前4种依次为CD17/CD17(28.13%)、CD41-42/CD17(23.44%)、CD41-42/CD41-42(17.19%)、IVS-Ⅱ-654/CD17(7.81%)；共检出等位基因突变类型8种，前4种依次为CD17 (46.09%)、CD41-42(35.16%)、IVS-Ⅱ-654(10.55%)和-28(5.08%)。结论： 贵州地区重型β-地中海贫血基因突变类型以CD17、CD41-42、IVS-Ⅱ-654最常见。

[关键词]β-地中海贫血； 基因； 突变； 反向点杂交； 贵州

地中海贫血是由于常染色体遗传性缺陷引起的珠蛋白肽链合成障碍性疾病，可使一种或几种珠蛋白肽链合成不足或完全缺乏，引起严重的溶血性贫血。β-地中海贫血临床上分为轻、中、重3种类型。重型β-地中海贫血严重影响患者的生活质量甚至生命，给家庭和社会带来沉重的经济和精神负担。广东、海南等省重型β-地中海贫血分子流行病学特征已有较多报道[1-3]。近年来也有贵州部分地区的重型β-地中海贫血分子流行病学研究的报道[4]。但尚无较大样本的重型β-地中海贫血基因突变类型分析。本研究对128例贵州籍重型β-地中海贫血患者基因型、频率进行调查，为贵州地区重型β-地中海贫血防治工作的开展及遗传咨询提供依据。

1对象与方法

1.1对象

2009年10月～2015年3月疑诊地中海贫血贵州籍患者1 980例，0～22岁，男83例，女45例。纳入标准：血常规检测提示小细胞低色素贫血、平均红细胞体积(MCV)<80 fl及平均红细胞血红蛋白含量(MCH)<27 pg，同时血红蛋白电泳HbA2>3.5%或HbF>30%。

1.2仪器与试剂

E-Cycler TM 96 PCR扩增仪，DNA提取试剂和β-地贫基因分型检测试剂盒由深圳益生堂生物企业有限公司提供。

1.3方法

抽取受检者EDTA-K2抗凝血2 mL，采用反向点杂交(reverse dot-blot, RDB) 技术检测中国人群中8种常见和9种少见的β-地中海贫血基因突变类型，包括CD41-42(-CTTT)，IVS-Ⅱ-654(C→T)，CD 17(A→T)，-28(A→G)，CD71-72(+A)，βE(CD26 G→A)等，见表1。操作步骤按说明书进行。

表1　中国人群17种β-地贫基因突变类型

2结果

2.1重型β-地中海贫血

疑诊1 980例患者中，检出重型β-地中海贫血患者128例，检测率为12.93%，其中纯合子62例(48.44%)，双重杂合子66例(51.56%)。

2.2基因突变类型

128例重型β-地中海贫血患者，共检出14种β-地中海贫血基因突变类型，前4种基因突变类型依次为CD17/CD17 、CD41-42/CD17、CD41-42/CD41-42 及IVS-Ⅱ-654/CD17，总构成比76.57%，后10种基因突变类型较少见，总构成比23.43%，见表2。检出8种β-地中海贫血等位基因突变类型，前4种突变类型依次为CD17、CD41-42、IVS-Ⅱ-654和-28，总构成比96.88%，后4种突变类型较少见，构成比3.12%，见表3。

表2　128例重型β-地中海贫血基因突变类型分布

表3　128例重型β-地中海贫血等位

3讨论

地中海贫血是最常见的遗传病之一，全球约有1.5 %的人口是地中海贫血基因携带者，每年约有60万重型地中海贫血患儿出生[5]。不同类型的基因缺陷导致患者不同的临床表现，并影响其治疗效果及预后[6-7]。重型β-地中海贫血是一类致死致残性血液病，基因型为β0或β+的纯合子或双重杂合子状态，使β链完全或几乎完全不能合成，患者出现慢性进行性溶血性贫血[8]。由于β珠蛋白肽链合成的减少或缺乏，导致红细胞内HbA、HbA2和HbF比例失调。重型β-地中海贫血患者自出生后3～6个月起出现贫血、肝脾肿大及颧骨隆起、眼距增宽、鼻梁低平等特殊“地中海贫血”面容，X线检查可见外板骨小梁条纹清晰呈直立的毛发样，发育滞后。

贵州是β-地中海贫血的高发地区，有调查显示，贵州6个县(市)少数民族β-地中海贫血发病率为5.4%[9]，而发生率最高的民族是贵州从江县的侗族，高达7.85%[10]。本研究发现，目前贵州地区重型β-地中海贫血基因突变类型有14种，以CD17/CD17、CD41-42/CD17、CD41-42/CD41-42、IVS-Ⅱ-654/CD17这4种基因型的构成比最高，共占76.57%，等位基因突变频率以CD17发生率最高，与课题组前期的研究结果一致[11]。单可人等[4]对贵阳地区15例重症β-地中海贫血患儿基因突变研究结果显示前3种基因突变类型是依次为CD41-42、、IVS-Ⅱ-654、CD17，与本研究结果不完全一致，可能是病例数较少的原因。我国南方各省β-地中海贫血基因突变类型以CD41-42、IVS-Ⅱ-654、CD17和-28多见，但各突变类型所占的比例有所不同，福建、台湾以IVS-Ⅱ-654最常见[12-13]，广西、广东、重庆和珠海以CD41-42 最常见[14-17]，四川[18]和贵州[19]又以CD17最常见，云南以βE(CD26)最常见[20]，可见β-地中海贫血基因突变类型存在明显的异质性。同一国家、不同地区、不同民族因遗传背景的不同，地中海贫血基因突变的突变谱和频率不完全相同。贵州地区重型β-地中海贫血突变类型以CD17、CD41-42、IVS-Ⅱ-654最常见，针对这些常见基因突变类型实施未婚青年群体筛查、加强孕期检查以及产前基因诊断可以有效降低重型β-地中海贫血患儿的出生缺陷。

4参考文献

[1] 刘冬霞,刘玉线,黄美琼,等.广东省清远地区地中海贫血基因分型情况分析[J].医学检验, 2013(11): 93-95.

[2] 钱新华,徐湘民,程少杰,等.用反向点杂交法对广东地区35例重型β-地中海贫血患儿及双亲的基因突变研究[J].中华医学遗传学杂志,1996(5):262-265.

[3] 林向斌,岑居荣,李治亲,等.海南农村347对有中间型或重型地中海贫血遗传风险夫妇的相关情况调查分析[J].海南医学,2014(22): 3397-3401.

[4] 单可人,张惠,何燕,等.贵阳地区重症β-地中海贫血患儿及双亲基因突变型的分析[J].中华儿科杂志,2002(8): 493-495.

[5] Higgs DR,Engel JD,Stamatoyanhopoulos G. Thalassemia[J]. Lancet, 2012(379):373-383.

[6] Viehimky EP.Changing patterns of thalassemia worldwild[J].Annalsof the New York Academy of Sciences, 2005(1054):18-24.

[7] 徐葵,曾瑞平.对142例8地中海贫血基因携带者进行缺失型 α-地中海贫血基因分析[J].中华血液学杂志, 1999(4): 206-207.

[8] 谢秀君,韦天彬,余洪莉.汕头市金平城区地中海贫血人群筛查与基因诊断结果分析[J].现代医院, 2010(11):148-149.

[9] 喻芳,钟春琍,周强,等.贵州少数民族地区β-地中海贫血的分子流行病学研究[J].中华医学遗传学杂志, 2010(27):700-703.

[10]谢渊,齐晓岚,单可人,等.贵州从江侗族人群β-地中海贫血调查[J].中国地方病学杂志, 2005(24):81-82.

[11]刘兴梅,苏莉,李贵芳,等.贵州地区β-地中海贫血基因突变类型分析[J].中华医学遗传学杂志, 2014(5):561-564.

[12]饶兆英,周红平,曾毓华,等.江西地区β-地中海贫血基因突变类型的分析[J].中国优生与遗传杂志, 2002(10):20-21.

[13]吴维青,金晴,蔡筠,等.湖南籍人群α、β地中海贫血流行病学调查及突变类型分析[J].中国优生与遗传杂志, 2007(15):43-44.

[14]丁燕玲,罗世强,韦家伟,等.地中海贫血基因携带者476例基因检测分析[J].广西医学, 2015(8):1178-1180.

[15]刘冬霞,刘玉线,黄美琼,等.广东省清远地区地中海贫血基因分型情况分析[J].医学检检, 2013(11):93-95.

[16]刘海燕,宪莹,苏庸春,等. 101例重型β-地中海贫血基因谱及其临床表现[J]. 重庆医科大学学报, 2015(4):555-559.

[17]李佩芳,庞文正.珠海地区635例地中海贫血基因检测结果分析[J]. 中国实用医药, 2015(25):17-18.

[18] Fucharoen S, Winichagoon P. Hemoglobinopathies in Southeast Asia: molecular biology and clinical medicine. Hemoglobin, 1997(21):299-319.

[19]黄盛芳,罗盛娟,阮铮艳,等.贵州省都匀市布依族中学生地中海贫血基因携带率调查[J]. 中国计划生育学杂志, 2015(10):667-669.

[20] Hill AV. Molecular epidemiology of the thalassaemias (including Haemoglobin E). Baillieres Clin Haematol, 1992(5):209-38.

(2016-01-16收稿，2016-03-27修回)

中文编辑： 戚璐； 英文编辑： 刘华

Analysis of Gene Mutation Types of Severe β-thalassemia in Guizhou Province

LIU Xingmei， SU Li， LI Guifang， WU Xian， WANG Rulei， HUANG Shengwen

(DepartmentofClinicalLaboratory,GuizhouProvincialPeople'sHospital,Guiyang550002，Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To investigate the types and distribution of gene mutations of severe β-thalassemia in Guizhou province. Methods: 1980 cases of patients of Guizhou suspected of beta thalassemia from November, 2009 to March, 2011 were recruited in this study. Reverse dot blot hybridization (RDB) was adopted to detect common types of β-thalassemia mutations in Chinese population and 128 cases of patients were diagnosed as severe β-thalassemia, whose mutant genotype and distribution frequency were analyzed. Results: In 128 β-thalassemia cases, there were 62 mutant homozygotes and 66 compound heterozygotes. A total of 14 β-thalassemia major genotypes mutations and 8 allelic gene mutations were detected. In term of distribution frequency, the first four high frequency of 14 mutations were CD17/CD17(28.13%), CD41-42/CD17(23.44%), CD41-42/CD41-42(17.19%), IVS-Ⅱ-654/CD17(7.81%), respectively. At the same time, the first four high frequency of 8 allelic gene mutations were CD17 (46.09%), CD41-42(35.16%), IVS-Ⅱ-654(10.55%) and -28(5.08%), respectively. Conclusion: In severe β-thalassemia of Guizhou province, the main genetic mutations are CD17, CD41-42 and IVS-Ⅱ-654.

[Key words]region; beta-thalassemia; gene; mutation; reverse dot blot； Guizhou

[中图分类号]R556.61

[文献标识码]A

[文章编号]1000-2707(2016)04-0407-03

*[基金项目]贵州省卫生厅资助项目(gzwkj2013-1-148)； 贵州省贵阳市资助项目[筑科合同(20151001)社61号]

**通信作者 E-mail:hsw713@sina.com

网络出版时间：2016-04-20网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160420.1838.042.html