李佑锋，彭　浩，高建芳，高　晶，陈　宇，吴秀山，李永青

(湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心， 中国 长沙　410005)



TCF25干扰慢病毒载体的构建与鉴定

李佑锋，彭浩，高建芳，高晶，陈宇，吴秀山，李永青*

(湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心， 中国 长沙410005)

摘要为构建一个针对TCF25(transcription factor 25)基因的慢病毒干扰载体, 设计并合成3组针对TCF25的短发夹RNA序列 (shRNA)，通过基因重组技术连入 pLL3.7载体，酶切鉴定及DNA测序后，重组正确的pLL3.7质粒与病毒包装质粒共转染293FT细胞，培养48 h后，分别收集细胞培养上清液，感染H9C2细胞，Western-blot检测TCF25在H9C2细胞中的表达．结果显示TCF25蛋白在H9C2细胞中的表达被抑制．这说明TCF25的慢病毒干扰载体构建成功．

关键词TCF25基因；293FT细胞；H9C2 细胞；慢病毒载体

TCF25(transcription factor 25)是在小鼠胚胎发育过程中广泛表达的一个含有bHLH结构域的转录因子，且其C端还含有一个功能未知的DUF654结构域．根据TCF25广泛的表达模式和包含的转录激活结构域，推测其可能在脑和心脏等各种器官发育过程中发挥重要的调控作用[1-3]．同时，已有研究表明TCF25作为SRF信号通路的抑制因子调控基因的表达，且能够抑制P19CL6细胞向心肌细胞分化[4]，但其具体作用机制需要继续探索．

RNA干扰(RNA interference，缩写RNAi)是指在进化过程中高度保守的双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)诱发的基因沉默现象，能够特异性剔除或关闭靶基因的表达[5]．目前，该技术已被广泛用于探索基因功能和基因治疗领域等[6]．RNAi技术主要是将siRNA序列设计为一段……