王红莹+方瑞

摘 要：为了深入研究鱼类RNA剪接相关基因snrpc的作用机制，实验应用RT-PCR研究了斑马鱼成鱼组织中snrpc mRNA的表达模式，并比较分析了鲫鱼中snrpc的表达。结果显示，斑马鱼snrpc在垂体和卵巢中有表达，而鲫鱼中在肾脏、垂体和卵巢中有表达，表明snrpc在不同鱼类中具有组织表达的差异性。

关键词：斑马鱼；snrpc；组织表达分析

中图分类号 S965.299 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）08-21-02

Abstract：In order to further study the mechanism of fish's snrpc relevant to RNA splicing，we researched the expression of mRNA in zebrafish's and crucian carp's tissues by RT-PCR. Zebrafish's snrpc expression in the pituitary and oocyte，while the crucian carp's expression in kidney pituitary and oocyte. Preliminary results show that zebrafish's snrpc has specific expression in different tissue.

Key words：Zebrafish；Snrpc；Tissue distribution

在负责RNA剪切的因子中，snRNP蛋白是最关键的一类。SNRPC是snRNP蛋白中的一种，但至今研究仍较少。在鱼类早期发育过程中，细胞的快速分裂需要RNA的正确剪切，推测SNRPC在此过程中发挥着重要的功能。本研究中应用RT-PCR研究斑马鱼以及经济鱼类鲫鱼成鱼组织中snrpc mRNA的表达模式，以期进一步揭示SNRPC的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料 （1）实验品种：斑马鱼、鲫鱼。（2）主要仪器及设备：Sequi-Gen电泳仪系统，Bio-RabGONGSI；定量移液器，Gilson；凝胶成像系统，Bio-RabGONGSI；PCR仪，Bio-RabGONGSI；恒温摇床、隔水式恒温培养箱、低温水浴锅、高速冷冻离心机、超净工作台、恒温水浴锅，上海精宏。（3）主要试剂：PCR taq酶，TaKaRa；限制性内切酶，NEB；质粒提取试剂盒、PCR纯化试剂盒、酶切胶回收试剂盒，上海生工；Trizol、逆转录试剂盒，TOYOBO。

1.2 实验方法

1.2.1 snrpc基因引物的设计 根据NCBI上预测的snrpc的全长序列，利用primer 5.0设计引物。

1.2.2 mRNA及蛋白表达水平的检测

1.2.2.1 斑马鱼及鲫鱼中各组织总RNA的提取及cDNA合成 斑马鱼和鲫鱼各10条，分别取心脏、肝脏、肾脏、脾脏、脂肪、肌肉、垂体、下丘脑、端脑、小脑、延髓、精巢、卵巢50～100mg，各加600μL TRIZOL；研磨并静置3min，加氯仿抽提，离心后将上清液转到新Rnase-free EP管中，在管中加入等体积的异丙醇沉淀；……