张文晓，张碧丽

(天津市儿童医院，天津300370)

阿奇霉素对阿霉素肾病大鼠的肾保护作用及机制

张文晓，张碧丽

(天津市儿童医院，天津300370)

目的 观察阿奇霉素对阿霉素肾病的治疗作用，探讨其作用机制。方法 将135只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、泼尼松组、阿奇霉素组、联合组，每组27只。除对照组外，其余四组采用两次尾静脉注射阿霉素制备肾病模型；对照组尾静脉注射同等剂量的生理盐水。造模第5周开始每日晨起阿奇霉素组灌胃给予阿奇霉素62.5 mg/(kg·d)，泼尼松组灌胃给予泼尼松12.5 mg/(kg·d)，联合组分别灌胃给予同等剂量的阿奇霉素及泼尼松，对照组及模型组均灌胃给予等剂量生理盐水，均1次/d，连续给药28天。治疗前及治疗第2、4周末检测24 h尿蛋白、尿肌酐(Ucr)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、总蛋白(Tp)、白蛋白(Alb)、总胆固醇(TCho)、内生肌酐清除率(Ccr)及IL-2、IL-12、IL-6等。结果 治疗期间模型组24 h尿蛋白、BUN、Scr、TCho逐渐升高，Ucr、Tp、Alb、Ccr逐渐降低，血清IL-2、IL-12水平逐渐降低，血清IL-6水平逐渐升高(P均<0.05)；与模型组比较，阿奇霉素组、泼尼松组、联合组治疗第2、4周24 h尿蛋白、BUN、Scr、TCho均降低，Ucr、Tp、Alb、Ccr均升高，血清IL-2、IL-12水平均升高，血清IL-6水平均降低，联合组上述改变更显著，组间比较P均<0.05。结论 阿奇霉素治疗阿霉素肾病效果较好，其与泼尼松联合应用效果更显著；降低血清IL-6、升高血清IL-2和IL-12水平可能是阿奇霉素的作用机制。

肾病综合征；阿奇霉素；泼尼松；白细胞介素

肾病综合征以大量蛋白尿、低白蛋白血症、高脂血症为主要表现，TH1/TH2失衡可能是其发病机制之一[1,2]。研究发现，TH1细胞因子IL-2、IL-12及TH2细胞因子IL-6在肾病综合征进展过程中随TH1/TH2平衡偏倚发生变化。阿奇霉素属大环内酯类抗生素，可通过调节炎症介质的释放发挥抗炎及免疫调节作用[3]。阿霉素肾病大鼠模型的主要表现及病理变化类似于人类肾病综合征，尤其是儿童最常见的微小病变型肾病，目前该模型已被国内外学者普遍用于儿童肾病的研究。2015年3～5月，本研究观察了阿奇霉素对阿霉素肾病大鼠的治疗效果，现分析结果并探讨其作用机制。

1 材料及方法

1.1 材料 健康雄性Wistar大鼠135只，体质量180～200 g，鼠龄(40±5)d，SPF级，许可证编号：SCXK(京)2012-0001，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。阿奇霉素(0.25 mg/片，批号：H91417)，购自辉瑞制药有限公司。注射用盐酸多柔比星(阿霉素，10 mg/支，批号：130710)，购自浙江海正药业股份有限公司。醋酸泼尼松片(5 mg/片，批号：130820)，购自天津力生制药股份有限公司。IL-2、IL-12、IL-6 ELISA试剂盒，购自美国R&D公司。金属代谢笼由天津实验动物中心提供。

1.2 模型制作与处理 135只大鼠适应性喂养7天，随机分为对照组、模型组、阿奇霉素组、泼尼松组、联合组，每组27只。除对照组外，其余四组采用两次尾静脉注射阿霉素制备肾病模型[4]；对照组尾静脉注射同等剂量的生理盐水。造模第4周末，造模的四组大鼠均出现大量蛋白尿、低白蛋白血症、高脂血症，提示造模成功。第5周开始每日晨起阿奇霉素组灌胃给予阿奇霉素62.5 mg/(kg·d)；泼尼松组灌胃给予泼尼松12.5 mg/(kg·d)；联合组分别灌胃给予阿奇霉素及泼尼松，剂量同前；对照组及模型组均灌胃给予等剂量生理盐水；均1次/d，连续给药28天。给药期间各组均自由摄取基础饲料及饮水。

1.3 相关指标观察 治疗前及治疗第2、4周末行以下指标检测：①血、尿生化指标：治疗前及治疗第2、4周末分别将大鼠置于代谢笼，禁食、不禁水，收集24 h尿液，检测24 h尿蛋白及尿肌酐(Ucr)；每次留尿后每组随机抽取9只大鼠取尾静脉血，离心取血清，检测尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、总蛋白(Tp)、白蛋白(Alb)、总胆固醇(TCho)、AST、ALT、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)，计算内生肌酐清除率(Ccr)。②血清IL-2、IL-12、IL-6：采用ELISA法检测血清IL-2、IL-12、IL-6，具体步骤参照试剂盒说明书，根据吸光度值(OD值)在标准曲线上确定其浓度。

2 结果

2.1 各组血、尿生化指标比较 治疗期间模型组24 h尿蛋白、BUN、Scr、TCho逐渐升高(P均<0.05)，Ucr、Tp、Alb、Ccr逐渐降低(P均<0.05)；治疗第2、4周阿奇霉素组、泼尼松组、联合组24 h尿蛋白、BUN、Scr、TCho均明显低于模型组，Ucr、Tp、Alb、Ccr明显高于模型组，联合组上述改变更显著，组间比较P均<0.05。见表1。

表1 各组治疗前后血、尿生化指标变化±s)

注：与对照组同时间点比较，aP<0.05；与模型组同时间点比较，bP<0.05；与阿奇霉素组同时间点比较，cP<0.05；与泼尼松组同时间点比较，dP<0.05；与同组治疗前比较，eP<0.05；与同组治疗2周比较，fP<0.05。

2.2 各组血清IL-2、IL-12、IL-6水平比较 治疗前及治疗第2、4周模型组血清IL-2、IL-12水平逐渐降低(P均<0.05)，血清IL-6水平逐渐升高(P均<0.05)；治疗第2、4周，阿奇霉素组、泼尼松组、联合组血清IL-2、IL-12水平明显高于模型组，IL-6水平明显低于模型组，联合组上述改变更显著，组间比较P均<0.05。见表2。

3 讨论

肾病综合征患者体内存在细胞免疫失衡及细胞因子水平紊乱[5,6]。TH1、TH2两种细胞由共同前体TH0细胞在不同细胞因子刺激下产生[7]。IL-2主要由TH1细胞产生，是在机体复杂的免疫网络中发挥调节作用的最主要细胞因子，可激活各种免疫细胞，特别是诱导T细胞增殖和发挥免疫效应，并具有独立的降低肾病综合征患者蛋白尿水平的作用[8,9]。此外，IL-12可刺激TH1细胞增殖，促进TH0细胞向TH1细胞分化。Yildiz等[10]报道，IL-12可以独立调节肾病综合征患者血管通透性，在肾病综合征的发病机制中发挥一定作用。IL-6主要由Th2细胞产生，可作用于多种靶细胞，可与其他细胞因子相互作用启动或促进肾组织的炎症损伤，影响蛋白尿的产生、发展，促进肾脏病理改变，导致肾功能降低[11]。TH1、TH2细胞相互调节在机体细胞免疫过程中发挥重要作用。

本研究结果显示，模型组血清IL-2、IL-12明显低于对照组，提示阿霉素肾病大鼠体内TH0细胞向TH1细胞分化不足，TH1细胞及其分泌的细胞因子减少。给药治疗期间模型组血清IL-2、IL-12水平呈进行性降低，蛋白尿水平持续上升，说明大鼠肾脏损伤加重，推测IL-2、IL-12可能对肾脏具有保护作用；但其血清IL-6水平逐渐升高，提示阿霉素肾病大鼠体内TH2细胞被激活；且血清IL-6水平升高与蛋白尿增加具有一致性， 提示IL-6一定程度上可反映肾脏损伤程度。上述结果提示，IL-2、IL-12、IL-6参与了阿霉素肾病的发生、发展过程，阿霉素肾病大鼠体内TH1/TH2平衡可能偏向TH2细胞。

表2 各组治疗前后血清IL-2、IL-12、IL-6水平比较

注：与对照组同时间点比较，aP<0.05；与模型组同时间点比较，bP<0.05；与阿奇霉素组同时间点比较，cP<0.05；与泼尼松组同时间点比较，dP<0.05；与同组治疗前比较，eP<0.05；与同组治疗2周比较，fP<0.05。

阿奇霉素为一种新型的大环内酯类抗生素，不仅具有抗菌作用，还可抑制中性粒细胞产生过氧化物，减轻中性粒细胞的趋化和黏附作用，抑制炎症细胞因子释放，进而发挥抗炎作用。研究发现，阿奇霉素可以通过抑制TH2细胞产生的细胞因子发挥抗炎及调节免疫作用[12,13]；大环内酯类抗生素联合糖皮质激素可显著提高抗炎效果，并可减少糖皮质激素引起的不良反应[14]。本研究中阿奇霉素组治疗后与模型组比较，其蛋白尿水平明显下降，血清IL-6水平降低，IL-2、IL-12水平升高；提示阿奇霉素不仅可抑制TH2细胞的过度激活以降低IL-6水平，亦可促进TH1细胞分化上调IL-2、IL-12水平，结合血、尿生化指标的明显好转，说明阿奇霉素对阿霉素肾病大鼠的治疗作用可能与其对IL-2、IL-6、IL-12的调节作用有关[15]。本研究结果还显示，联合组各项指标改善情况最为显著，提示阿奇霉素联合泼尼松治疗阿霉素肾病大鼠具有协同作用，可更有效延缓肾病进展，但二者的协同作用机制有待进一步研究。

综上所述，阿奇霉素治疗阿霉素肾病效果较好，与泼尼松联合应用效果更显著；降低血清IL-6水平，增加血清IL-2、IL-12水平可能是阿奇霉素的作用机制。

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天津市应用基础与前沿技术研究计划项目(13JCYBJC22300)。

张碧丽(E-mail: zhangbili218@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.28.011

R692

B

1002-266X(2016)28-0034-03

2015-11-19)