殷俏，郭淑芹，张云良，王翯，肖艳新，王君，程晓东，温晓英（河北省保定市第一中心医院内分泌一科，河北保定071000）



视黄醇结合蛋白4、中性粒细胞淋巴细胞比值与2型糖尿病视网膜病变的关系

殷俏，郭淑芹，张云良，王翯，肖艳新，王君，程晓东，温晓英
（河北省保定市第一中心医院内分泌一科，河北保定071000）

摘要：目的检测视黄醇结合蛋白4（RBP4）及中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）在2型糖尿病视网膜病变（DR）的表达水平，探讨RBP4、NLR与DR的相关性。方法选取163例患者作为研究对象，其中单纯2型糖尿病（T2DM）组41例，非增生性2型糖尿病视网膜病变（NPDR）组40例，增生性2型糖尿病视网膜病变（PDR）组42例，40例正常体检人作为对照组（NC）。空腹10 h后检测所有受试者静脉血糖、三酰甘油、胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、尿酸、同型半胱氨酸、空腹胰岛素、中性粒细胞与淋巴细胞，计算NLR。稳态模型评估胰岛素抵抗指数。酶联免疫吸附法测定血清RBP4。采用方差分析、相关分析及Logistic逐步回归进行统计学分析。结果与NC组比较，T2DM组、NPDR组、PDR组RBP4、NLR显著升高，与NPDR组比较RDR组RBP4显著升高（P均<0.05）。RBP4与收缩压、舒张压、空腹血糖、胰岛素抵抗指数、三酰甘油、胆固醇、同型半胱氨酸、NLR呈正相关，与高密度脂蛋白呈负相关（P<0.05）。Logistic回归分析发现收缩压、空腹血糖、RBP4、NLR、胰岛素抵抗、胆固醇为DR的危险因素。结论RBP4与NLR在DR患者表达水平增高，且NLR可影响DR患者血清RBP4表达，RBP4与NLR是DR的危险因素，与DR相关。

关键词：视黄醇结合蛋白4；中性粒细胞与淋巴细胞比值；2型糖尿病；糖尿病视网膜病变

糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）是糖尿病的常见并发症。据统计，2013年全世界约3.82亿人患有糖尿病，中国拥有9 800万20～79岁的糖尿病患者，其中DR的患病率为24.7%～37.5%[1]。其中大约10%的患者存在视力障碍，2%的患者失明，随着糖尿病患病率的增加，预计到2030年糖尿病患者失明的人数将增加一倍[2]。但其发病机制目前尚不清楚，由于DR过程中出现多种炎症反应因素的参与，越来越多的学者认为DR可能是一种慢性、低度炎症反应过程[2]。中性粒细胞与淋巴细胞比例（neutrophil-lymphocyte ratio，NLR）是一种廉价、简单、实用的炎性标记物，研究证明NLR是癌症和心血管疾病预后的危险因素[3-4]，脂肪因子视黄醇结合蛋白4（retinol binding protein 4，RBP4）由肝脏合成，参与炎症活动，促进胰岛素抵抗[5]。有研究提示慢性炎症与胰岛素抵抗有关[6]，可加速糖尿病患者微血管病变的进展。因此，RBP4与NLR可能相关且与DR有密切关系。

1　资料与方法

1.1一般资料

选取2014年11月-2015年3月于保定市第一中心医院住院治疗的163人。其中，男性88例，女性75例，年龄45～77岁，平均（55.07±9.611）岁，分为单纯2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）组41人，非增生性2型糖尿病视网膜病变（nonproliferative diabetic retinopathy，NPDR）组40人，增生性2型糖尿病视网膜病变（proliferative diabetic retinopathy，PDR）组42人；同时，选取40例正常人作为对照组（NC）。糖尿病患者均符合1999年WHO世界卫生组织2型糖尿病诊断标准；依据2002年国际糖尿病性视网膜病变分期标准对DR患者分期。排除①患有感染性疾病、肝脏疾病、血液系统疾病、恶性肿瘤疾病；②伴有1型糖尿病、特殊类型糖尿病、糖尿病急性并发症、甲状腺疾病、自身免疫疾病、外伤等疾病的患者；③1月内服用过影响血液流变学药物、糖皮质激素、非甾体抗炎等药物。

1.2指标测定

所有视网膜病变患者均初次就诊且未应用药物治疗，询问并记录所有研究对象的年龄、性别，测量其身高、体重、血压，均禁食10 h后次日清晨采集空腹静脉血。日本希森美康公司生产XE-2100仪器测量中性粒细胞、淋巴细胞数，计算NLR=中性粒细胞数/淋巴细胞数。日立全自动7600生化仪器检验空腹静脉血糖（fasting blood-glucose，FPG）、三酰甘油（triglyceride，TG）、胆固醇（cholesterol，CHO）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）、高密度脂蛋白（high-density lipoprotein，HDL）、血尿酸（uric acid；UA）、同型半胱氨酸（homocyteine，HCY）。电化学发光法（德国罗氏电化学发光仪Cobas6000-E601）测定空腹胰岛素（fasting insulin，FINS）。稳态模型评估胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）=空腹血糖（mmol/L）×空腹胰岛素（mIU/L）/22.5。日本爱科莱HA8180型仪器测量HbA1C含量。酶联免疫吸附法测定RBP4（上海酶联免疫生物科技有限公司提供试剂盒），批内差异<6%，批间差异<10%。近2个月使用二甲双胍250 mg/d以上为二甲双胍使用阳性。（本位研究对象为初发视网膜病变患者研究其发病机制，未对患者治疗效果追查，因此对治疗效果未进行分析，以后会对本部分患者进行跟踪调查再做分析）。

1.3统计学方法

采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，Shapiro-Wilk检验资料是否符合正态分布，正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，非正态分布资料经对数转换，转换后仍为非正态以中位数及四分位数间距表示；方差齐性检验采用Levene检验，方差齐的多组间比较用方差分析，组间差异比较采用q检验；方差不齐多组间比较采用非参数H检验，两两比较采用Nemenyi检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验。相关分析采用Pearson相关分析方法。视网膜病变是否发生的危险因素采用Logistic回归分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1各组基本资料比较

4组年龄、性别差异无统计学意义（均P>0.05）。随着病情加重4组病程、收缩压、舒张压、体重指数呈升高趋势（均P<0.05），见表1。

2.2各组生化指标比较

随着病情加重4组HbA1C、FBG、FINS、HOMA-IR、TG、CHO、UA、Hcy呈升高趋势，高密度脂蛋白呈下降趋势（均P<0.05）。与NC组比较，DM组、NPDR组、PDR组RBP4、NLR显著升高（RBP4 q值分别为3.088、5.768、4.870，NLR q值分别为0.47、1.03、1.83，均P<0.05）。与NPDR组比较PDR组RBP4显著升高（q值分别为30.291，P<0.05），与DM组比较NPDR组、PDR组NLR显著升高（q值分别为0.64、1.41，均P<0.05），见表2。

2.3Pearson相关分析

收缩压、舒张压、FBG、HOMA-IR、TG、CHO、Hcy、NLR与RBP4呈正相关（r分别为0.235、0.200、0.336、0.428、0.172、0.242、0.900、0.268，P <0.05），与HDL呈负相关（r=-0.406，P<0.05）。

表1　各组基本资料比较

表2　各组生化指标比较（±s）

表2　各组生化指标比较（±s）

注：1）与NC组比较，P<0.05；2）与T2DM组比较，P<0.05；3）与NPDR组比较，P<0.05

组别　HbA1C/%　FBG/（mmol/L）　FINS/（μU/L）　HOMA-IR　TG/（mmol/L）　CHO/（mmol/L）NC组　4.62±0.76　5.53±0.31　6.45（3.65，9.01）　1.67（1.56，1.73）　1.05±0.29　4.62±0.65 T2DM组　8.48±1.731）　9.77±3.401）　10.01（4.59，15.01）1）　3.14（1.97，4.69）1）　1.82±0.681）　4.92±1.00 NPDR组PDR组8.65±1.181）9.07±1.651）10.93±2.971）2）10.96±1.521）2）12.95（6.21，17.14）1）12.21（8.43，16.92）1）6.28（3.37，8.29）1）2）6.92（4.82，8.58）1）2）1.61±0.791）1.82±0.761）5.76±1.301）2）5.90±1.301）2）F/H值　84.51　42.24　8.82　104.875　11.876　15.278 P值　0.000　0.000　0.03　0.000　0.000　0.000组别　LDL/（mmol/L）　HDL/（mmol/L）　UA/（μmol/L）　Hcy/（μmol/L）　RBP4/（mg/L）　NLR NC组　2.63±0.54　1.52±0.25 270.56±51.51 11.98±1.34　41.80±6.22　0.35±0.11 T2DM组　2.89±0.78　1.13±0.251）　290.90±86.10 12.49±1.51 45.20±7.091）　0.39±0.991）NPDR组PDR组2.55±0.69 2.70±0.87 1.08±0.261）1.01±0.321）2）308.83±73.891）319.91±90.191）14.37±1.831）2）16.16±2.301）2）3）48.19±6.491）57.13±8.131）2）3）0.44±0.931）2）0.48±0.111）2）F/H值　1.742　34.313　2.931　47.828　33.224　15.02 P值　0.161　0.000　0.036　0.000　0.000　0.000

表3　2型糖尿病视网膜病变患者危险因素的Logistic回归分析

2.4Logistic回归分析

将所有患者按照有无DR分组后以病程、收缩压、舒张压、FBG、HDL、TG、CHO、RBP4、NLR为协变量进行logistic回归分析，结果显示收缩压、FBG、RBP4、NLR、CHO、HOMA-IR是DR患者的危险因素，见表3。

3　讨论

DR是糖尿病严重的微血管病变之一，其病变过程包括白细胞黏附、聚集和移行，血管渗透性增加和血流动力学改变，但具体发病机制尚不清楚。因此，对DR的发病机制、早期筛查及治疗方法的探索显得尤为重要，目前认为的发病机制是高血糖、多元醇-肌醇代谢异常、血流动力学障碍、凝血机制异常、蛋白质非酶促糖基化、氧自由基形成及血管增生因子等多种因素的协同作用[1]。RBP4是血液中唯一转运视黄醇的蛋白，主要在肝脏合成，脂肪组织是第2来源。NLR一种廉价的反应炎症的指标，可预测糖尿病肾病恶化程度[7]。本研究结果提示，血清RBP4值随着DR的加重而增加，原因可能是RBP4能够通过某些促炎机制导致视网膜毛细血管功能障碍进而促进DR的发展。Farjo等[8]研究发现RBP4通过视黄醇特有的膜受体STRA6及部分激活NADPH氧化酶刺激视网膜毛细血管内皮细胞表达血管细胞黏附分子-1、细胞间黏附分子-1、E-选择素、单核细胞趋化蛋白-1和白细胞介素-6，进而促使白细胞聚集和黏附到内皮细胞，导致视网膜毛细血管内皮细胞功能障碍加速DR进程。Du等[9]研究发现RBP4通过视黄醇独有机制驱动炎症反应促进DR的进展，具体表现为视网膜白细胞介素-18（IL-18）的mRNA及活化（裂解）的IL-18蛋白表达增多。有研究发现RBP4可以抑制内皮细胞的胰岛素活性，导致血管舒张依赖的一氧化氮水平减弱，促进血管内皮功能的紊乱[10]。研究发现PDR组及NPDR组较T2DM组NLR值明显升高，其原因可能归因于高糖对中性粒细胞及淋巴细胞的作用。有报道，血糖控制较差的2型糖尿病患者的外周血淋巴细胞氧化性DNA损伤增加[11]，淋巴细胞凋亡增多[12]；与此相反，外周血中性粒细胞凋亡减少，受损中性粒细胞清除时间延长，连延至慢性炎症[13]，慢性炎症反过来又增加胰岛素抵抗，加速高糖毒性，同时本文得出PDR组及NPDR组FBG及HOMA-IR较T2DM组明显升高，与上述结论相同。Logistic回归分析显示RBP4和NLR是DR的危险因素，因此，2型糖尿病患者RBP4和NLR增高提示DR病情加重。

本研究发现RBP4与NLR正相关，但两者之间的具体影响机制尚不清楚。猜测NLR与RBP4都与炎症有关，都能促使白细胞聚集黏附，损伤血管内皮细胞，进而在DR的进程中起到协同作用。

本研究发现RBP4与HOMA-IR正相关，胰岛素抵抗可引起糖、脂类、蛋白代谢异常，增加DR的发生。同时，得出RBP4与CHO、TG正相关，与HDL-C呈负相关，Wu等[14]研究显示在血脂异常患者中血清RBP4促进小而密低密度脂蛋白胆固醇及氧化低密度脂蛋白胆固醇合成增多，高血脂可通过多元醇及非酶促糖基化促进组织氧化，同时高脂增加血液黏度，减慢血流速度，增加视网膜血管缺氧，导致血管内皮功能紊乱，使DR加重。Hcy为含硫氨基酸，是蛋氨酸代谢过程中的重要中间产物，本研究得出RBP4与Hcy正相关，具体机制国内尚未相关报道。可能的机制是Hcy可减少一氧化氮的释放，促进血小板聚集，损害血管内皮，在损伤血管上机制与RBP4相似。本文得出DR患者UA较正常人升高，国内研究UA>212 mmol/L，DR发生率及发病风险增加[15]。

综上所述，本研究结果显示：DR患者RBP4与NLR增高，提示两者是DR的危险因素之一；NLR可影响DR患者血清RBP4表达；为DR的较早筛查提供依据、发病机制提供新思路、治疗提供新方法。但RBP4与NLR在DR的具体作用机制需要更深入的研究。

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（张蕾编辑）

Relationship of serum RBP4 and neutrophil-lymphocyte ratio with type 2 diabetic retinopathy

Qiao Yin,Shu-qin Guo,Yun-liang Zhang,He Wang,Yan-xin Xiao,Jun Wang,Xiao-dong Cheng，Xiao-ying Wen
(The First Department of Endocrinology,the First Central Hospital of Baoding,Baoding,Hebei 071000,China)

Abstract:Objective To detect the expression level of retinol binding protein 4 (RBP4) and neutrophil-lymphocyte ratio (NLR) in type 2 diabetic retinopathy (DR) patients,and to explore the relationship of RBP4 and NLR with DR.Methods A total of 163 subjects were investigated,including 41 cases of type 2 diabetes mellitus (T2DM group),40 cases of non-proliferative type 2 diabetic retinopathy (NPDR group),42 cases of proliferative diabetic retinopathy (PDR group) and 40 cases of normal control (NC group).Venous plasma glucose,circulating triglycerides,total cholesterol,low-density lipoprotein cholesterol,high-density lipoprotein cholesterol,uric acid,homocysteine,neutrophil count and lymphocyte count were detected 10 hours after fasting test; and NLR was calculated.Fasting insulin was measured by electrochemical luminescence,and insulin resistance (HOMA-IR) was determined by homeostasis model assessment.Serum RBP4 was measured by enzyme linked immunosorbent assay.Data were statistically analyzed using analysis of variance,correlation analysis and logistic stepwise regression analysis.Results Compared with the NC group,RBP4 and NLR of the T2DM,NPDR and PDR groups significantly increased (P < 0.05),the increase of RBP4 in the PDR group was more significant than that in the NPDR group (P < 0.05).Pearson correlation analysis showed that RBP4 correlated with systolic blood pressure,diastolic blood pressure,fasting blood glucose,book=55,ebook=60HOMA-IR,circulating triglycerides,total cholesterol,homocysteine and NLR; but negatively correlated with highdensity lipoprotein cholesterol (P < 0.05).Logistic stepwise regression analysis showed that RBP4,NLR,systolic pressure,fasting blood glucose,HOMA-IR and cholesterol were the risk factors of DR.Conclusions RBP4 expression level and NLR increase in patients with DR,and NLR can affect serum RBP4 expression in DR patients.RBP4 and NLR are the risk factors for DR,and associated with DR.

Keywords:retinol binding protein 4; neutrophil-lymphocyte ratio; type 2 diabetes mellitus; diabetic retinopathy

[通信作者]郭淑芹，E-mail：981491509@qq.com；Tel：15733810869

收稿日期：2015-10-15

文章编号：1005-8982（2016）06-0054-05

DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2016.06.012

中图分类号：R587.1

文献标识码：A